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Functional analysis of malaria vaccine candidate antigen GAMA

疟疾疫苗候选抗原GAMA的功能分析

基本信息

批准号：
21K06990
负责人：
長岡ひかる
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University (2022)Ehime University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

マラリアワクチン開発は喫緊の課題でのため、これまでに我々はコムギ無細胞系を基盤に、新規赤血球期ワクチン候補分子の同定やヒトタンパク質ライブラリーによる赤血球レセプター探索を精力的に行ってきた。本研究では、近年見出した赤血球期ワクチン候補抗原であるGPI-anchored merozoite antigen (GAMA)の赤血球侵入における分子機能を明らかにするため、1)ヒト赤血球表面タンパク質ライブラリーによるGAMA相互作用分子の探索、 2)抗GAMA8モノクローナル抗体 (mAb)の作製、 3)mAbによるタンパク質相互作用ならびに原虫増殖に対する阻害活性の測定を行い、GAMAの分子機能に必須なタンパク質相互作用を明らかにする。2021年度は、コムギ無細胞系を用いてGSTタグ付きGAMA分子およびヒト赤血球タンパク質ライブラリーを合成し、アルファスクリーン法を用いて赤血球側相互作用分子を探索、複数個の赤血球側相互作用分子を発見した。さらにGAMA8抗原をマウスへ免疫し、抗血清の原虫抗原への反応性を確認した。 2022年度はウサギに免疫して得た抗体からモノクローナル抗体を複数個作出し、ウエスタンブロットとIFAを用いて抗血清の原虫抗原への反応性を確認、作成したモノクローナル抗体の原虫への増殖阻害活性を測定するため培養熱帯熱マラリア原虫に対し増殖阻害活性を測定した。最終年度は数段階の濃度を用いて増殖阻害活性を測定するとともに、作製したmAbがアルファスクリーン法で同定した赤血球レセプター分子とGAMA8の相互作用をどの程度阻害するのか、確立済みの Biacoreを用いた結合阻害活性測定系を用いて判定する。これにより、GAMA8-赤血球レセプターの相互作用を特異的に阻害できるmAbと、阻害しない抗GAMA8 mAbを各複数クローン樹立する。

マラリアワクチン开発は urgent project でのため、これまでに我々はコムギ cell-free をBasic base, new standard erythrocytic stage candidate molecule, same as the same as the original molecule Erythroblast レセプターExplore the energy of に行ってきた. In this study, GPI-anchored merozoite antigen (GAMA), a candidate antigen of the erythrocyte stage, was found in recent years to invade erythrocytes. Exploration of molecular function of におけるを明らかにするため, 1) ヒトerythroblast surface タンパクquality ライブラリーによるGAMA interacting molecules, 2) Production of anti-GAMA8 モノクローナル antibody (mAb), 3) Determination of mAb's ability to inhibit protozoal reproduction and its activity, GAMA's molecular function, and its molecular function.る. In 2021, は, コムギCell-free を Used いてGSTタグPay きGAMA Molecule およびヒトerythroblast タンパク性ライブラリーをSynthesis of し, アルファスクリーン method を using erythrocyte side interacting molecules を exploration, plural erythrocyte side interacting molecules を発见した.さらにGAMA8 antigen をマウスへimmunityし, antiserum protozoal antigen へのreaction confirmationした. 2022 annual immunity test A plurality of protozoal antigens made of し、ウエスタンブロットとIFAを using いて antiserum Confirmation of anti-reactive properties and production of anti-protozoan anti-protozoan anti-protozoal antibodiesをMeasurement of the proliferation-inhibiting activity of the protozoan protozoa するためCultivation of the hot マラリア protozoa に対し. In the final year, the concentration of several stages was determined by the proliferation inhibition activity of the company, and the mAb was produced by the company.ーン法で同定したerythroblast レセプターmolecule とGAMA8のinteraction をどのdegree obstruction するのか、establish済みのBiacore's binding inhibitory activity assay system is used to determine the binding activity.これにより, GAMA8-erythroblast レセプターのinteraction をspecific にblocking できるmAbと, blocking しない anti-GAMA8 mAbをeach complex クローン Establishment する.