全ての亜型のA型インフルエンザウイルスのHA蛋白質に保存される新規抗原部位の同定

鉴定所有亚型甲型流感病毒 HA 蛋白中保守的新抗原位点

• 批准号: 21K07038
• 负责人: 山吉 誠也
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: National Center for Global Health and Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07038/
• 关键词: インフルエンザウイルス; モノクローナル抗体; HA蛋白質; ヒトモノクローナル抗体

現行のインフルエンザワクチンを接種した場合、抗原性変化が起きやすいHA蛋白質のヘッド領域を認識する抗体が主に誘導される。そのため、流行株とワクチン株の抗原性が一致せず、ワクチンの有効性が著しく低下することがある。この問題を解決するため、抗原性変化が起こりにくい領域、つまり“異なる亜型のHA蛋白質の間で保存された領域”を免疫抗原として用いるワクチン、いわゆる次世代型インフルエンザワクチンの研究が世界的に進められている。本研究では、全ての亜型のA型インフルエンザウイルスのHA蛋白質を認識するヒトモノクローナル抗体の性状解析を行い、この抗体が認識する領域が新規抗原性保存領域であることを証明する。本年度は、まず本モノクローナル抗体のウイルス増殖抑制メカニズムの解析を行った。赤血球凝集抑制試験、ポリカリオン（シンシチウム）形成抑制試験、ウイルス放出抑制試験およびADCCレポーターアッセイによる評価を行い、抗体が保有する阻害効果を明らかにした。また、本抗体が認識するエピトープに対する抗体の保有率を、エスケープ変異を導入した組換えHA蛋白質と野生型HA蛋白質に対する反応性を比較することで調査した。本抗体が認識するエピトープをクライオ電子顕微鏡解析により明らかにするため、本抗体のFab領域を精製するとともに、三量体組換えHA蛋白質を準備した。準備したFab抗体が三量体組換えHA蛋白質に結合することが確認された。

当接种当前的流感疫苗接种时，主要诱导了容易发生抗原变化的HA蛋白头部区域的抗体。因此，流行菌株和疫苗菌株的抗原性可能不匹配，从而导致疫苗的有效性显着降低。为了解决这一问题，正在全世界对疫苗进行研究，疫苗是所谓的下一代流感疫苗，该疫苗使用了不太可能发生抗原变化的区域，即“ HA蛋白不同亚型之间保守的区域”，作为免疫抗原。在这项研究中，我们分析了人类单克隆抗体的特性，这些抗体识别流感A A A A AS AS类型的HA蛋白，并证明该抗体识别的区域是一个新型的抗原保守区域。今年，我们首先分析了抑制这种单克隆抗体病毒生长的机制。使用血凝抑制测试，多晶片（Sincytium）形成抑制测试，病毒释放抑制测试和ADCC报告测定法进行评估，以阐明抗体携带的抑制作用。此外，研究了该抗体识别的表位抗体的保留，通过将其反应性与已引入的重组HA蛋白进行比较，这些蛋白与逃生突变和野生型HA蛋白引入。为了阐明这种抗体通过低温显微镜识别的表位，纯化了该抗体的FAB区域，并制备了三聚体重组HA蛋白。已确认制备的FAB抗体与三聚体重组HA蛋白结合。

项目成果

Immunological Correlates of Prevention of the Onset of Seasonal H3N2 Influenza

• DOI: 10.1093/infdis/jiac152
• 发表时间: 2022-04-27
• 期刊: JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
• 影响因子: 6.4
• 作者: Okuda，Moe;Sakai-Tagawa，Yuko;Kawaoka，Yoshihiro
• 通讯作者: Kawaoka，Yoshihiro