２型自然リンパ球新規抑制因子の同定と抗アレルギー・抗線維化作用の探索

2型先天淋巴细胞新型抑制因子的鉴定及抗过敏和抗纤维化作用的探索

• 批准号: 21K07067
• 负责人: 崔 广為
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07067/
• 关键词: 自然リンパ球; ２型自然リンパ球; アレルギー; 肺線維症; 2型自然リンパ球

ILC2は迅速かつ大量に2型サイトカインを産生することにより感染防御の最前線に立つ自然リンパ球である。一方、ILC2は気管支喘息や食物アレルギーなどのアレルギー疾患と線維症の発症および増悪にも深く関与していることから、定常状態において細胞数と活性化を抑制するメカニズムの解明も重要である。本研究はまずCD45 KOマウスおよびCD45 KO×Rag2 KOマウスを用いた解析、骨髄キメラマウスを利用した野生型（WT）とCD45 KO ILC2細胞の競合実験などにより、新たに内因性の新規ILC2抑制因子としてCD45を同定した。CD45の下流シグナルによって制御される遺伝子とILC2の各成熟段階におけるこれらの遺伝子の変化を明らかにするため、野生型（WT）とCD45 KOマウスの骨髄および肺から未熟ILC2または成熟ILC2を単離し、デジタルRNAシークエンス法にて網羅的な遺伝子発現を解析した。また、CD45はチロシン脱リン酸化酵素であるため、ILC2におけるCD45の基質に候補であるLck、SykやFynなどの脱リン酸化状態をWTとCD45 KOマウス間で比較した。CD45 KOマウスまたはCD45 KO×Rag2 KOマウスにおいて、ILC2、特にKLRG1陽性の成熟ILC2が著しく増加していたことから、重要な転写因子の発現変化を検討し、このILC2の増加と細胞分化、生存や増殖の変化との関連性を調べた。さらに、ILC2はIL-7やIL-33などのサイトカインによって維持および活性化される。WTとCD45 KOマウス由来のILC2を刺激すると、IL-5とIL-13の産生が著しく亢進していた。よって、CD45が生体内ILC2の細胞数と活性を抑制していることを見出し、その分子メカニズムも明らかになりつつある。

ILC2是一种天然的淋巴细胞，通过快速和大量生产2型细胞因子来处于感染保护的最前沿。另一方面，ILC2与过敏性疾病（如支气管哮喘和食物过敏和纤维化）深深相关，因此阐明抑制细胞数和稳态激活的机制也很重要。这项研究首先使用CD45 KO小鼠和CD45 KO×RAG2 KO小鼠分析CD45是一种新型的内源ILC2抑制剂，以及使用骨髓嵌合小鼠之间的野生型（WT）和CD45 KO ILC2细胞之间的竞争实验。为了澄清CD45下游信号调节的基因的变化以及在ILC2成熟的每个阶段的基因，未成熟的ILC2或成熟的ILC2从野生型（WT）和CD45 KO小鼠的骨髓和肺中分离出来，并通过数字RNA Sequerencing分析了CD45 KO小鼠的肺（WT）和CD45 KO小鼠的肺。此外，由于CD45是一种酪氨酸去磷酸化酶，因此比较了WT和CD45 KO小鼠之间的LCK，SYK和FYN的去磷酸化态，它们是ILC2中CD45的候选底物。在CD45 KO小鼠或CD45 KO×RAG2 KO小鼠中，ILC2，尤其是KLRG1阳性成熟的成熟ILC2，显着增加，因此我们研究了重要转录因子表达的变化，并研究了ILC2的增加与细胞分化，生存和生存，生存，生存，生存，生存，生存，生存，生存，生存，生存，生存。此外，ILC2由IL-7和IL-33等细胞因子维持和激活。 WT和CD45 KO小鼠对ILC2的刺激显着增加了IL-5和IL-13的产生。因此，已经发现CD45抑制了体内ILC2的细胞计数和活性，其分子机制越来越清晰。