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Inverted apicobasal polarity of lung micropapillary adenocarcinoma-like organoids and its relationship to metastasis

肺微乳头状腺癌样器官的顶基底极性反转及其与转移的关系

基本信息

批准号：
21K07098
负责人：
梅田大介
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

肺微小乳頭がん（micropapillary carcinoma: MPC）のin vitro 培養モデル構築を目指して研究を行った結果、細胞株Aを低酸素下で細胞外基質Mを用いた三次元培養することにより、反転極性を呈するMPC様構造を誘導することに成功した。以上の研究内容を「MPC様構造体の製造方法」として発明特許出願している。さらに、MPC様構造誘導には転写因子Hが重要であることをCRISPR/Cas9を用いた転写因子Hノックアウト細胞を作製し、証明した。一方で、RhoファミリーGタンパク質であるRhoA、Rac1およびCDC42の活性調節はMPC構造に重要な上皮頂底極性形成に関与することが報告されている。本研究では、RhoAやそのeffector分子であるRho-kinase（ROCK）が上記条件によるMPC様構造誘導に関与することを、各種ROCK阻害薬やRhoAのdominant negative変異体を用いて明らかにした。MPCの悪性化機構として、免疫回避能亢進に着目し研究を行った。その結果、MPC様構造体は2D培養体と比較して、Natural killer（NK）細胞の細胞障害活性に対する感受性が顕著に低下していることを明らかにした。また、上記感受性低下には転写因子Hが重要であることも明らかにした。以上の結果は、MPCの悪性化機構として、NK細胞に対する感受性低下による免疫回避能亢進が関与することおよび上記感受性低下にはMPCの立体構造が重要であることを示唆している。

The results of the study on the construction of micropapillary carcinoma (MPC) in vitro culture were successful. Cell line A was cultured in low acid medium and extracellular matrix M was cultured in medium with three dimensional medium. The above research contents are titled "Production Methods of MPC Structures" and "Explaining the Permission to Produce". In addition, MPC structure induction factor H is important, and CRISPR/Cas9 can be used to control it. The activity regulation of RhoA, Rac1 and CDC42 in MPC structure is important for the formation of epithelial cell polarity. In this study, Rho-kinase (ROCK) was used to induce the formation of MPC under the above conditions, and various ROCK inhibitors and RhoA dominant negative variants were used. The study of MPC's biological mechanism and immune avoidance function was carried out. The results showed that the MPC construct was more sensitive to cell damage than the 2D culture. The sensitivity factor H is important. The above results indicate that the mechanism of MPC differentiation and the immune avoidance function of NK cells are important for the development of MPC.