骨肉腫の腫瘍免疫誘導制御に関わる分子機構解明と新規がん免疫療法の開発

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昨年度に続きdropout screeningから抽出された遺伝子に関し、骨肉腫細胞にshRNAによるノックダウンを行い、C57BL/6（B6）と免疫不全のC57BL/6 SCID（B6scid）マウスに移植し、腫瘍形成能の比較を行った。昨年度検証した遺伝子はいずれも、B6とB6scid間でみられる腫瘍形成の差は小さかった。そこで、検証する遺伝子の幅を広げ、候補遺伝子の上位に位置するのミトコンドリア内の電位依存性アニオンチャネル及び、ATP依存性プロテアーゼに関し評価を行った。しかし、腫瘍形成への影響は見られなかった。現在、抽出法の改良と評価を行うタイミングの検討を行っている。抽出された遺伝子群は、過去の報告からp53と関連が示唆された。そこで、AXT細胞でみられる変異p53の腫瘍免疫への関与を解析した。変異は一塩基置換によりアミノ酸置換R270Cがおこっていた。変異p53をCRISPR-Cas9によりノックアウト（KO）し、親株AXT細胞と変異p53をノックアウトした細胞をB6マウスに移植した結果、KO細胞由来の骨肉腫は親株由来に比較して小さかった。一方で、B6scidマウスに移植した結果と比較すると、親株由来の腫瘍重量を1として、KO細胞では1.5から4倍大きな腫瘍の形成がみられた。即ち、変異p53は、腫瘍免疫を抑制する可能性が示唆されたが、検討中である。一方、変異p53は細胞増殖を促進したが、浸潤、in vivoにおける転移能には影響を与えなかった。変異p53は野生型が有する転写活性を示さなかった。ChIP assayの結果、変異p53はDNAには結合するものの、DNA傷害時に転写活性に必要とされる結合部位には野生型p53と比較して結合量が少ないことが明らかとなった。以上の変異p53の生物学的意味、分子機構に関する知見は海外誌に発表した。