骨肉腫の腫瘍免疫誘導制御に関わる分子機構解明と新規がん免疫療法の開発

阐明骨肉瘤中肿瘤免疫诱导和控制的分子机制并开发新的癌症免疫疗法

• 批准号: 21K07134
• 负责人: 清水 孝恒
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hoshi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07134/
• 关键词: 骨肉腫; 腫瘍免疫; 転移巣; がん微小環境; 血管新生

昨年度に続きdropout screeningから抽出された遺伝子に関し、骨肉腫細胞にshRNAによるノックダウンを行い、C57BL/6（B6）と免疫不全のC57BL/6 SCID（B6scid）マウスに移植し、腫瘍形成能の比較を行った。昨年度検証した遺伝子はいずれも、B6とB6scid間でみられる腫瘍形成の差は小さかった。そこで、検証する遺伝子の幅を広げ、候補遺伝子の上位に位置するのミトコンドリア内の電位依存性アニオンチャネル及び、ATP依存性プロテアーゼに関し評価を行った。しかし、腫瘍形成への影響は見られなかった。現在、抽出法の改良と評価を行うタイミングの検討を行っている。抽出された遺伝子群は、過去の報告からp53と関連が示唆された。そこで、AXT細胞でみられる変異p53の腫瘍免疫への関与を解析した。変異は一塩基置換によりアミノ酸置換R270Cがおこっていた。変異p53をCRISPR-Cas9によりノックアウト（KO）し、親株AXT細胞と変異p53をノックアウトした細胞をB6マウスに移植した結果、KO細胞由来の骨肉腫は親株由来に比較して小さかった。一方で、B6scidマウスに移植した結果と比較すると、親株由来の腫瘍重量を1として、KO細胞では1.5から4倍大きな腫瘍の形成がみられた。即ち、変異p53は、腫瘍免疫を抑制する可能性が示唆されたが、検討中である。一方、変異p53は細胞増殖を促進したが、浸潤、in vivoにおける転移能には影響を与えなかった。変異p53は野生型が有する転写活性を示さなかった。ChIP assayの結果、変異p53はDNAには結合するものの、DNA傷害時に転写活性に必要とされる結合部位には野生型p53と比較して結合量が少ないことが明らかとなった。以上の変異p53の生物学的意味、分子機構に関する知見は海外誌に発表した。

Yesterday annual に 続 き dropout screening か ら spare さ れ た posthumous son 伝 に masato し, swollen flesh cell に shRNA に よ る ノ ッ ク ダ ウ ン を い, C57BL / 6 (B6) と immune insufficiency の C57BL / 6 SCID (B6scid) マ ウ ス し に transplantation and swollen sores can form の is を line っ た. The 検 syndrome of the previous year has a た remnant of 伝, a ずれ ずれ ずれ, and a <s:1> difference in the formation of でみられる abscess between B6と and b6 scid is <s:1> small さ った った った. そ こ で, 検 す る posthumous son 伝 の picture を hiroo げ, alternate but 伝 の upper position に す る の ミ ト コ ン ド リ ア の potential dependency within ア ニ オ ン チ ャ ネ ル dependency and び, ATP プ ロ テ ア ー ゼ に masato し review 価 を line っ た. The effects of へ へ on the formation of abscesses are found in られな った った. Now, the extraction method <s:1> improves the と evaluation 価を line うタ the うタ うタ the グ the 検 検 discusses the を line って the る る る. Extract the された subgroup 伝 and past <s:1> reports ら らp53と related が suggesting された. Youdaoplaceholder0 た で, AXT cell でみられる variation of p53, tumor immunity へ <e:1> and を analysis of た た. Change the <s:1> -base displacement によ ア ア ノ ノ acid displacement R270Cがお た って た た た. - different p53 を CRISPR - Cas9 に よ り ノ ッ ク ア ウ ト し (KO), parent strain と AXT cells - different p53 を ノ ッ ク ア ウ ト し た cells を B6 マ ウ ス に transplantation し た results, KO cell origin の flesh swelling は parent strain origin に compare し て small さ か っ た. Side で, B6scid マ ウ ス に transplantation し た results と す る と, 1 parent strain origin の swollen sores weight を と し て, KO cell で は 1.5 か ら four times as big as き な swollen sores の form が み ら れ た. That is, the possibility of ち, variant p53, and tumor immune を inhibition する が indicates されたが and 検 are in line with である. One side, the proliferation of variant p53 cells を promotes the たが, infiltration, and in vivoにおける転 migration can に に affect を and えな った った. The mutant p53 する転 wild type が has する転 written activity を indicating さな さな った った. DNA ChIP assay の results, - different p53 は に は combining す る も の の, DNA damage に に planning write activity necessary と さ れ る combining site に は wild-type p53 と compare し て combined with fewer が な い こ と が Ming ら か と な っ た. The biological significance and molecular structure of the above mutant p53 are に related to する and する, as seen in overseas journals に and た.

项目成果

骨肉腫腫瘍免疫の解析、新規免疫療法開発のための解析モデル基盤形成

骨肉瘤肿瘤免疫分析及新型免疫疗法开发分析模型平台的形成

• 发表时间: 2021
• 作者: 清水孝恒;木村聖美;杉原英志;信末博行;武藤章弘;佐谷秀行
• 通讯作者: 佐谷秀行

骨肉腫に対する MEK 阻害療法の検証

MEK 抑制疗法治疗骨肉瘤的验证

• 发表时间: 2021
• 作者: 木村 聖美;杉原 英志;山口 さやか;信末 博行;サンペトラ;オルテア;大槻 雄士;武藤 章弘;佐谷 秀行;清水 孝恒
• 通讯作者: 清水 孝恒

骨肉腫悪性化の分子基盤探索と薬物治療開発

探索恶性骨肉瘤的分子基础并开发药物治疗

• 发表时间: 2022
• 作者: 梅津知宏;樋口恒星;高梨正勝;大野慎一郎;原田裕一郎;黒田雅彦;清水孝恒
• 通讯作者: 清水孝恒

researchmap 清水孝恒

研究地图清水隆恒

R270C型のp53変異体は転写活性を失うも、骨肉腫の生体内進展には寄与しない

R270C p53突变体失去转录活性，但不会促进骨肉瘤的体内进展

• 发表时间: 2022
• 作者: 清水孝恒;杉原英志;信末博行;山口さやか;武藤章弘;佐谷秀行
• 通讯作者: 佐谷秀行