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骨肉腫の腫瘍免疫誘導制御に関わる分子機構解明と新規がん免疫療法の開発

阐明骨肉瘤中肿瘤免疫诱导和控制的分子机制并开发新的癌症免疫疗法

基本信息

批准号：
21K07134
负责人：
清水孝恒
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hoshi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07134/
关键词：
骨肉腫腫瘍免疫転移巣がん微小環境血管新生

项目摘要

昨年度に続きdropout screeningから抽出された遺伝子に関し、骨肉腫細胞にshRNAによるノックダウンを行い、C57BL/6（B6）と免疫不全のC57BL/6 SCID（B6scid）マウスに移植し、腫瘍形成能の比較を行った。昨年度検証した遺伝子はいずれも、B6とB6scid間でみられる腫瘍形成の差は小さかった。そこで、検証する遺伝子の幅を広げ、候補遺伝子の上位に位置するのミトコンドリア内の電位依存性アニオンチャネル及び、ATP依存性プロテアーゼに関し評価を行った。しかし、腫瘍形成への影響は見られなかった。現在、抽出法の改良と評価を行うタイミングの検討を行っている。抽出された遺伝子群は、過去の報告からp53と関連が示唆された。そこで、AXT細胞でみられる変異p53の腫瘍免疫への関与を解析した。変異は一塩基置換によりアミノ酸置換R270Cがおこっていた。変異p53をCRISPR-Cas9によりノックアウト（KO）し、親株AXT細胞と変異p53をノックアウトした細胞をB6マウスに移植した結果、KO細胞由来の骨肉腫は親株由来に比較して小さかった。一方で、B6scidマウスに移植した結果と比較すると、親株由来の腫瘍重量を1として、KO細胞では1.5から4倍大きな腫瘍の形成がみられた。即ち、変異p53は、腫瘍免疫を抑制する可能性が示唆されたが、検討中である。一方、変異p53は細胞増殖を促進したが、浸潤、in vivoにおける転移能には影響を与えなかった。変異p53は野生型が有する転写活性を示さなかった。ChIP assayの結果、変異p53はDNAには結合するものの、DNA傷害時に転写活性に必要とされる結合部位には野生型p53と比較して結合量が少ないことが明らかとなった。以上の変異p53の生物学的意味、分子機構に関する知見は海外誌に発表した。

A comparative study of the gene expression and tumor-forming ability of C57BL/6 (B6) and C57BL/6 SCID (B6scid) in vitro was conducted. The difference between B6 and B6scid was small. The amplitude and position of candidate vectors are determined by the potential-dependent detection and evaluation of ATP-dependent detection. The effect of swelling on the formation of tumors can be seen. Now, the improvement of the extraction method and the evaluation of the extraction method are discussed. Select the last group, the past report, p53, and the relationship. P53 is the key to immune response and resolution of tumor. The acid substitution R270C is the same as the acid substitution R270C. CRISPR-Cas9 is the parent plant of AXT cells. CRISPR-Cas9 is the parent plant of AXT cells. CRISPR-Cas9 is the parent plant of B6 cells. The results of transplantation of B6scid and KO cells were compared. The tumor weight of parent plant was 1. 5 times larger than that of KO cells. That is, different p53, tumor immune suppression possibility, such as expression, detection, etc. A party, different p53 cell proliferation, infiltration, in vivo, migration, and influence The wild type of p53 was found to have a high activity. ChIP assay results show that different p53 binding sites are required for DNA damage and binding sites are less than wild-type p53 binding sites. The biological significance and molecular mechanism of p53 are discussed in this paper.