Characterization of immune responses in tumor microenvironment of patients with clonal hematopoiesis

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固形がんにおいて加齢に伴うクローン性造血（CHIP：Clonal hematopoiesis of indeterminate potential）の合併は予後不良因子である。その原因として、クローン性造血に由来した遺伝子変異を有する免疫担当細胞が免疫応答を抑制し、がんの進展に有利ながん微小環境を生み出していると想定される。しかしながら、その機序は未だ明確ではない。本研究では、血中循環白血球とがん浸潤白血球のリンパ球、骨髄球の各画分の遺伝子変異をそれぞれ解析し、クローン性造血とがん微小環境における免疫応答との関連を詳らかにすることを目的としている。2021年度は15例の大腸がん手術検体から細胞を単離し、蛍光標識した各種抗体を用いて細胞を標識した。セルソーターにより各白血球画分を分けて回収し、DNAシークエンスのために各画分からDNAの抽出を行なった。回収できる細胞数の少ないCD14陽性細胞などの白血球画分は、DNAの増幅を行なった後にライブラリ調整を行なった。DNA増幅を行うにあたり、事前に至適な増幅条件（試薬、鋳型DNA量、増幅反応時間）についても検討した。2022年度はライブラリ調整の終了した検体から適宜DNAシークエンスを行い、腫瘍組織中に存在する免疫細胞の一部に遺伝子変異を認めることを確認した。末梢血細胞のDNAシークエンス結果との比較も行う予定である。また認めた変異についてin vitroでの機能アッセイを行うために、現在実験条件などを確認しながら準備を進めていいる。