Basic research on the development of new therapeutic methods for cancer metastasis targeting the CDCP1 extracellular domain

点击翻译按钮获取中文摘要

昨年度、臨床的にCDCP1及びMTSP-1の発現が重要である事を証明したため、CDCP1のmRNA発現とセリンプロテアーゼMT-SP1のmRNA発現と生命予後不良との関連が明らかとなった肺癌細胞株を用いて、MT-SP1によるCDCP1切断の有無をウエスタンブロットで確認したところ、CDCP1の切断にMT-SP1が関与する可能性が考えられた。そこで、配列の事なる2種類のMT-SP1 siRNAを用いてMT-SP1の蛋白質発現を抑制すると、CDCP1の切断が抑制されることを発見した。2種類のMT-SP1 siRNAは、それぞれMT-SP1蛋白質の抑制割合が異なっていたが、各々のMT-SP1蛋白質の抑制割合とCDCP1の切断量は相関していた。これら結果から、CDCP1はMT-SP1により切断の制御を受けていることが示唆された。さらに、CDCP1の多量体形成に関するMT-SP1の関与については、標識付のCDCP1変異体を用いた免疫沈降実験から、CDCP1のN末端側220アミノ酸の欠失変異体では、もう一方のCDCP1の結合量が他の変異体に比べて増加している事が明らかとなった。この領域は、CDCP1がMT-SP1で切断されて放出される領域の一部であることから、N末端側の220アミノ酸がCDCP1の多量体形成の結合領域である可能性を見出した。次に、MT-SP1によるCDCP1の切断が癌細胞の転移機構の制御に関わるかをまず細胞運動能により検証した。結果、MT-SP1 siRNAによるMT-SP1蛋白質の抑制は、癌細胞の細胞運動能を抑制する事が示された。今後は、MT-SP1によるCDCP1切断を介した細胞運動能がどの様な機構で制御されているのか、これまでに示してきた細胞内シグナル伝達、特にSrc型キナーゼの活性制御等を中心にシグナル伝達機構の解析をする予定である。