「造骨性」骨転移の診断治療法の開発に向けたWntシグナルパスウェイの役割の解明

溶骨型骨転移モデルはすでに確立されており、発生メカニズムの解明と治療法の開発が進んでいるが、造骨型骨転移のモデルはなく、その発生メカニズムも不明である。Wntシグナルパスウェイは、癌の発生などに関与し、骨形成や骨吸収への関与が報告されているが、骨転移への関与のエビデンスは存在しない。我々は造骨型の分子メカニズムを解明し、Wntシグナルパスウェイの促進または阻害による骨転移発生パターンを高精細CTイメージングで解析し、造骨型骨転移モデルの樹立と、画像診断法・治療法の開発を目指す。前年度までにWntファミリーメンバーのなかで、骨代謝に関連する可能性が高いWnt1、Wnt3a及びWnt5aの過剰発現ベクターを構築した。この発現ベクターを、我々が樹立した乳がん由来の溶骨型骨転移モデル5a-D-Luc-ZsGreen細胞に導入し、安定発現株を各8クローンずつ作成した。リアルタイムRT-PCRで発現レベルを確認し、Wnt高発現株を選択した。今年度は樹立したWnt1、Wnt3a及びWnt5aの高発現株とコントロールとして5a-D-Luc-ZsGreen細胞をメスのヌードマウスの左心室に心腔内移植し、骨転移動物モデルを作成した。IVISを用いたルシフェラーゼによる発光イメージングで、骨転移の経過を確認した。骨転移が見られた個体を小動物用マイクロCTで造骨性骨転移の有無を確認し、Wnt1高発現細胞を移植した個体に造骨が確認された。骨転移が確認された大腿骨と脛骨はサンプリングしHE染色を行った。

溶骨型骨転移モデルはすでに確立されており、発生メカニズムの解明と治療法の開発が進んでいるが、造骨型骨転移のモデルはなく、その発生メカニズムも不明である。Wntシグナルパスウェイは、癌の発生などに関与し、骨形成や骨吸収への関与が報告されているが、骨転移への関与のエビデンスは存在しない。我々は造骨型の分子メカニズムを解明し、Wntシグナルパスウェイの促進または阻害による骨転移発生パターンを高精細CTイメージングで解析し、造骨型骨転移モデルの樹立と、画像診断法・治療法の開発を目指す。前年度までにWntファミリーメンバーのなかで、骨代謝に関連する可能性が高いWnt1、Wnt3a及びWnt5aの過剰発現ベクターを構築した。この発現ベクターを、我々が樹立した乳がん由来の溶骨型骨転移モデル5a-D-Luc-ZsGreen細胞に導入し、安定発現株を各8クローンずつ作成した。リアルタイムRT-PCRで発現レベルを確認し、Wnt高発現株を選択した。今年度は樹立したWnt1、Wnt3a及びWnt5aの高発現株とコントロールとして5a-D-Luc-ZsGreen細胞をメスのヌードマウスの左心室に心腔内移植し、骨転移動物モデルを作成した。IVISを用いたルシフェラーゼによる発光イメージングで、骨転移の経過を確認した。骨転移が見られた個体を小動物用マイクロCTで造骨性骨転移の有無を確認し、Wnt1高発現細胞を移植した個体に造骨が確認された。骨転移が確認された大腿骨と脛骨はサンプリングしHE染色を行った。