Targeting basal autophagy as therapeutic drugs in neurodegenerative diseases

靶向基础自噬作为神经退行性疾病的治疗药物

• 批准号: 21K07422
• 负责人: 渡邊 義久
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07422/
• 关键词: オートファジー; 神経変性疾患; Beclin1; Rubicon; UVRAG; ハイスループットスクリーニング; Beclin1複合体; 治療薬; Basal Autophagy; 治療薬スクリーニング; Beclin-1; NanoBiT

Becin1複合体形成を指標としたBasal Autophagy活性の測定システムの開発のために、スプリット発光タンパク質NanoBitを利用しタンパク質-タンパク質相互作用解析を行った。HEK293細胞にLgBiT-Beclin1とSmBiT-UVRAG、LgBiT-Beclin1とSmBiT-Rubicon、LgBiT-Beclin1とSmBiT（ネガティブコントロール）の組み合わせで一過的に遺伝子導入を行った。一晩培養した後、発光基質Nano-Glo Live Cell Substrateを加え、マルチモードプレートリーダーGloMaxで発行測定を行った。その結果、すべての組み合わせで発光が認められ、ネガティブコントロールとして使用したLgBiT-Beclin1とSmBiTの組み合わせでも高い発光量であった。従って、本システムではベースの値が高いため目的タンパク質の相互作用を測定するのが非常に困難であった。この問題を解決するために、一過的発現ではなく安定発現株を作製し相互作用解析を行う。現在、本ベクターに薬剤耐性マーカーを導入している。また、コントロールとして使用するATG7_KOおよびRubicon_KO細胞をCRISPR/Cas9で作製した。これらの細胞も利用しオートファジー活性を測定する予定である。

Becin1 complex formation index Basal Autophagy activity determination of the development of the system, the use of light emitting NanoBit, the analysis of mass-mass interaction HEK293 cells contain LgBiT-Beclin1, SmBiT-UVRAG, LgBiT-Beclin1, SmBiT-Rubicon, LgBiT-Beclin1, SmBiT ( After a night of incubation, the light-emitting Nano-Glo Live Cell Substrate was added, and the GloMax assay was performed. As a result, the combination of LgBiT-Beclin1 and SmBiT can be used to increase the amount of light emitted. It is very difficult to measure the interaction between the two substances. The problem is solved, the problem is solved, the problem is solved. Now, this is the first time that I've ever had a chance to talk to you. CRISPR/Cas9 is controlled by ATG7_KO and Rubicon_KO cells. The cell phone activity was determined.

项目成果

霊長類脳におけるパーキンソン病関連分子α-シヌクレインの内在性発現プロファイル解析

灵长类脑中帕金森病相关分子α-突触核蛋白的内源表达谱分析

• 发表时间: 2023
• 作者: 田口勝敏;渡邊義久;辻村敦;田中雅樹
• 通讯作者: 田中雅樹

ALS-FTD変異SQSTM1/p62はNrf2-Keap1を介した酸化ストレス応答を抑制する.

ALS-FTD 突变体 SQSTM1/p62 抑制 Nrf2-Keap1 介导的氧化应激反应。

• 发表时间: 2021
• 作者: 渡邊 義久;田口 勝敏;上山 盛夫;永井 義隆;田中 雅樹.
• 通讯作者: 田中 雅樹.

神経特異的なオートファジー可視化トランスジェニックマウスの脳組織解析の試み.

尝试分析转基因小鼠的脑组织，使神经特异性自噬可视化。

• 发表时间: 2023
• 作者: 田中雅樹;岡﨑與德;田口勝敏;渡邊義久
• 通讯作者: 渡邊義久

パーキンソン病関連分子α‐シヌクレインのヒト脳内における内在性発現プロファイルについて

人脑中帕金森病相关分子α-突触核蛋白的内源表达谱

• 发表时间: 2021
• 作者: 田口勝敏;渡邊義久;辻村敦;田中雅樹
• 通讯作者: 田中雅樹