血清グライコミクスを用いた糖鎖腫瘍マーカーの同定と多項目同時診断システムの構築

血清糖组学鉴定聚糖肿瘤标志物及多项目同时诊断系统的构建

• 批准号: 21K07409
• 负责人: 岡本 三紀
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka International Cancer Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07409/
• 关键词: 腫瘍マーカー; 糖鎖; HPLC; MS; 質量分析

生体内の多くの血清タンパク質は糖鎖修飾を受け、その糖鎖構造の一部は腫瘍マーカーとして利用されている。また、血清中には遊離糖鎖も存在するが、すみやかに尿中へと排出される。本研究は、これらの糖鎖を標的にHPLC-basedグライコミクス解析を行い、従来法では検出されなかった腫瘍マーカーを新たに見出し、複数マーカーを用いた質量分析による新たながん診断システムの開発を目的としている。がん患者および健常人のHPLC糖鎖プロファイルを作成するために、血清糖たんぱく質から切り出した糖鎖を蛍光標識し、多段階HPLCで溶出分離する。N型糖鎖の解析にはその切断酵素PNGase Fがよく用いられる。一方、O型糖鎖は切り出す酵素がないため、化学的に切断する方法が利用されるが、同時に多量のN型糖鎖も切り出されてしまう。そのため、順相HPLCではN型糖鎖と伸長したO型糖鎖の溶出位置が重なり、圧倒的に量の多いN型糖鎖に埋もれて検出が難しい。そこで全てのO型糖鎖を検討対象とするため、血清N型糖鎖を先に酵素で切り出し分離してから、O型糖鎖を抽出精製する方法の検討を行った。確立した方法を用いて血清をrapid PNGase Fで反応させた後、糖タンパク質と遊離N型糖鎖を分離し、糖タンパク質からO型糖鎖を遊離させた。ほとんどのN型糖鎖とO型糖鎖の分離が可能であったが、糖鎖構造の詳細な解析によりO型糖鎖のソースであるムチンの回収率が安定していないことが示唆された。おそらくムチンの糖鎖修飾に依存した回収率となり、検体ごとにばらつきが予測されたため、O型糖鎖回収方法を再検討した。また、質量分析を用いた多項目同時測定は、尿検体から抽出したPA化糖鎖mixtureを用い、複数糖鎖構造の同時測定を検討した。

In the body, there is a lot of blood serum and sugar locks in the body, and the sugar locks in the body are modified and used.また, the presence of free sugar locks in the serum, するが, and the excretion of free sugar in the urine. In this study, the standard HPLC-based analysis of sugar locks was carried out, and the method was used to analyze the sugar locks. The new word "マーカーを新たに见出し", plural "マーカーを用いた" Analyze the new diagnosis of the new diagnosis and treatment of the disease.がんPatient および正人のHPLC sugar lock プロファイルをmade するために, serum sugar The quality of the product is cut, the sugar is locked, the light is marked, and the multi-stage HPLC is separated by dissolution. N-type sugar lock analysis and cutting enzyme PNGase F is used. On the one hand, O-type sugar locks are cut out and enzymes are cut out, chemical cutting methods are used, and N-type sugar locks are cut out and cut out in large quantities at the same time.そのため, cis-phase HPLC, N-type sugar lock, elongation, O-type sugar lock, dissolution position, heavy pressure, and pressure pouring, N-type sugar lock, N-type sugar lock, and difficulty in dissolution.そこで全てのO-type glycosylated enzymeでcut り出しSeparation してから、O-type sugar lock をextraction and refinement する method の検question を行った. The established method is to use いてserum rapid PNGase F to reverse the reaction, and to separate the free N-type sugar locks and the free O-type sugar locks. It is possible to separate N-type sugar locks and O-type sugar locks and analyze the structure of sugar locks in detail.よりO-type sugar lock のソースであるムチンの recovery rate が stabilization していないことが Show instigation された.おそらくムチンのsugar lock modification にdepends on the recovery rate となり, 検体ごとにばらつきがforecast されたため, O-type sugar lock recovery method を検した. It is used for simultaneous measurement of multiple items for quality analysis, extraction of PA sugar lock mixture from urine, and simultaneous measurement of multiple sugar lock structures.

项目成果

がん患者尿中におけるD-arabinose付加遊離N型糖鎖の同定

癌症患者尿液中添加 D-阿拉伯糖的游离 N-聚糖的鉴定

• 发表时间: 2022
• 作者: 岡本三紀;半澤健;村上博子;谷口直之;宮本泰豪
• 通讯作者: 宮本泰豪

Identification of β1-3 galactosylglucose-core free-glycans in human urine

人尿液中 β1-3 半乳糖基葡萄糖核心游离聚糖的鉴定

• DOI: 10.1016/j.ab.2021.114427
• 发表时间: 2022
• 期刊: Analytical Biochemistry
• 影响因子: 2.9
• 作者: Tanaka-Okamoto Miki;Hanzawa Ken;Murakami Hiroko;Mukai Mikio;Miyamoto Yasuhide
• 通讯作者: Miyamoto Yasuhide

尿中遊離糖鎖の検出と疾患マーカーとしての可能性

尿液中游离糖链的检测及其作为疾病标志物的潜力

• 发表时间: 2022
• 作者: 半澤健;岡本三紀;村上博子;中嶋和紀;宮本泰豪
• 通讯作者: 宮本泰豪

新規逆相スケールによる高速液体クロマトグラフィー溶出時間標準化法

使用新型反相刻度的高效液相色谱洗脱时间标准化方法

• 发表时间: 2022

尿中酸性遊離糖鎖とそのがん患者における変化の解析

癌症患者尿酸性游离糖链及其变化分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 半澤健;岡本三紀;村上博子;宮本泰豪
• 通讯作者: 宮本泰豪