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DUX4による非コードDNAの転写活性化の病理的意義の研究

DUX4非编码DNA转录激活的病理意义研究

基本信息

批准号：
21K07426
负责人：
三橋弘明
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07426/
关键词：
非コードDNA DUX4 FSHD トランスクリプトーム筋疾患 ERV

项目摘要

顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー(FSHD)は常染色体優性遺伝の筋疾患で、筋細胞の壊死と自己免疫疾患にも似た炎症所見を特徴とする。FSHD患者の筋肉では、健常者には発現していない転写因子DUX4-flが発現しており、このDUX4-flの異所的な発現がFSHDの原因と考えられている。我々はDUX4-flが遺伝子領域以外にも「非コードDNA」である様々な反復配列(ERV, サテライトDNA, LINE, Alu, MaLR等)からの転写を誘導していることを明らかにしてきた。しかし、その完全長配列の同定には至っておらず、それら反復配列の発現と疾患との関係もまだ明らかになっていない。そこで本研究ではDUX4-flにより発現誘導される非コードDNAを完全に明らかにし、FSHD病態との関連を探ることを目的としている。令和４年度はDUX4-fl, DUX4-s発現細胞におけるdsRNAの存在頻度を免疫染色によって調べた。また、dsRNAに対する細胞内応答系の１つであるPKRの活性化についてウェスタンブロットで検討した。dsRNAの形成を阻害するためのGapmerをデザインし合成した。また、非コードDNAからの転写産物が翻訳されている可能性を探るため、DUX4-fl, DUX4-s発現細胞のRNAを用いてRibosomel profilingをおこなった。これまでにおこなったロングリードRNA-seqのデータとRibosome profilingのデータを合わせて解析し、翻訳された場合の機能ドメインの検索などをデータベース解析した。

Facial, shoulder, and wrist muscles (FSHD) are characterized by autosomal dominant genetic disorders, muscle cell death, and inflammatory disorders. FSHD occurs in muscle and muscle in healthy individuals, and DUX4-fl occurs in abnormal muscle and muscle. I am not DUX4-fl, but I am not DUX 4-fl. I am DUX 4-fl. The relationship between the occurrence of a disease and the occurrence of a complete long alignment is clearly defined. In this study, DUX4-fl was induced to induce non-apoptotic DNA and FSHD pathologies. The frequency of dsRNA in DUX4-fl, DUX4-s developing cells was modulated by immunostaining in the first and fourth years. The activation of PKR in the intracellular response system to dsRNA is discussed in detail. The formation of dsRNA is inhibited by the synthesis of Gapmer. To explore the possibility of using Ribosomel profiling to develop RNA from DUX4-fl, DUX4-s cells. This is the first time that we have analyzed the function of Ribosome profiling.