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ピロリ菌感染および未感染胃癌の発症機序解明に向けたトランスオミクス解析

转组学分析阐明幽门螺杆菌感染和未感染胃癌的发病机制

基本信息

批准号：
21K08010
负责人：
松本昂
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Oita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ピロリ菌感染症および関連疾患と胃細菌叢との関連性を明らかにするため、モンゴルを含むアジア地域から収集された胃粘膜上皮生検におけるマイクロバイオーム解析を実施した。特に、モンゴルにおいて確認された、ピロリ菌未感染胃癌患者におけるEnterococcus（Ent）の増殖が原因と考えられるdysbiosisの原因を探るため、本菌を分離培養し、次世代シーケンスにより全ゲノム配列決定し、主要病原因子について検索した。ピロリ菌の新たな病原因子の検索に向け、ピロリ菌株のメタボローム解析およびRNA Seqを実施し、現在解析中である。また、Entまたはピロリ菌感染による新たな発がん機序を探るため、AGS細胞株、さらに、昨年度までに樹立した幽門部上皮細胞由来の胃オルガノイドを用いて感染実験を実施した。Entまたはピロリ菌感染に起因するゲノムの不安定性を評価するため、Comet AssayによるDNA二本鎖切断（double-strand break: DSB）の観察、加えて、WBによりDSBの特徴であるリン酸化H2AX発現を評価した。Entおよびピロリ菌感染に伴う細胞の形態学的変化、ROS産生、DSBを確認することができた。次に、トランスウェルを用いて、菌と細胞との接着を遮断し、この病原因子が接着に起因するものかどうかを評価した。その結果、ピロリ菌では、細胞接着によってのみDSBが確認され、一方、Entは、細胞上清中に分泌される細胞外毒素がDSBに関与していることが明らかとなった。加えて、感染時における2次元幽門部胃オルガノイドの組織学的変化をHE染色、MUC5ACおよびMUC6の局在、さらに、30K遺伝子をターゲットにしたmRNAマイクロアレイを実施した。上記研究成果をまとめ、2023年5月に米国で開催されるDigestive Disease Week 2023にて発表予定である。

The relationship between bacterial infections and related diseases and gastric bacterial flora is clearly identified and analyzed in the context of gastric mucosal epithelium. In particular, it has been confirmed that the cause of the proliferation of Enterococcus (Ent) in gastric cancer patients who have not been infected by Pseudomonas aeruginosa and the cause of dysbiosis have been investigated. The bacteria are isolated and cultured, the next generation of bacteria must be completely determined, and the main pathogenic factors must be detected. The detection of new pathogenic factors in bacteria is carried out in the presence of RNA Seq. A new mechanism for the development of pyloric epithelial cell infection was explored in the AGS cell line. Evaluation of DNA double-strand break (DSB) by Comet Assay and detection of DNA double-strand break (DSB). Ent and bacteria infection is accompanied by morphological changes, ROS production, and DSB identification. In addition, it is necessary to evaluate the causes of infection of bacteria and cells. The results showed that DSB was secreted from the supernatant of the cell. In addition, histological changes in the pyloric region of the stomach during infection, HE staining, MUC5AC and MUC6 were performed at the time of infection. The results of the above research are scheduled to be released in May 2023.