Analysis of immune response mechanisms of CTL and NK cells in HBV infection HBV infection

マウス肝細胞の90%以上がヒト肝細胞に置換されたヒト肝細胞キメラマウス（以下、キメラマウス）に対し、B型肝炎ウイルス（HBV）genotype Cキャリアから採取した血清を接種し、HBV持続感染キメラマウスを作製。非感染マウス、感染3日後、10日後、5週間後、8週後、32週後にマウス肝組織より採取したヒト肝細胞を用いて、ヒト肝細胞内の遺伝子発現を次世代シークエンサーにて解析。HBV感染後、マウス血中のHBV DNA量は感染6～8週目にプラトーに達することから、非感染マウスの肝組織とHBV感染8週後のマウス肝組織における遺伝子発現の相違を検討したところ、両マウス群間で有意に発現が変化し、かつ2倍以上の発現変化を認めた遺伝子が225遺伝子抽出された。これらの遺伝子からmicroRNAやpseudo geneを除き、196遺伝子を抽出した。本研究では、HBV感染に伴う生体内のリンパ球への影響を解析することが目的であることから、抽出された遺伝子の情報を検索し、膜蛋白とされる28遺伝子、分泌蛋白とされる37遺伝子に解析対象を絞り込んだ。さらに、次世代シークエンス解析結果の再現性を確認するため、各time pointで回収したマウス肝組織より再度mRNAを抽出し、real time PCRを実施した。その結果、約70%の遺伝子において再現性が確認された。そこで、再現性が確認された遺伝子の機能について情報収集を行い、NK細胞や細胞傷害性T細胞の活性化に関与することが推定される遺伝子に解析対象を絞り、機能解析を開始した。

マウス肝細胞の90%以上がヒト肝細胞に置換されたヒト肝細胞キメラマウス（以下、キメラマウス）に対し、B型肝炎ウイルス（HBV）genotype Cキャリアから採取した血清を接種し、HBV持続感染キメラマウスを作製。非感染マウス、感染3日後、10日後、5週間後、8週後、32週後にマウス肝組織より採取したヒト肝細胞を用いて、ヒト肝細胞内の遺伝子発現を次世代シークエンサーにて解析。HBV感染後、マウス血中のHBV DNA量は感染6～8週目にプラトーに達することから、非感染マウスの肝組織とHBV感染8週後のマウス肝組織における遺伝子発現の相違を検討したところ、両マウス群間で有意に発現が変化し、かつ2倍以上の発現変化を認めた遺伝子が225遺伝子抽出された。これらの遺伝子からmicroRNAやpseudo geneを除き、196遺伝子を抽出した。本研究では、HBV感染に伴う生体内のリンパ球への影響を解析することが目的であることから、抽出された遺伝子の情報を検索し、膜蛋白とされる28遺伝子、分泌蛋白とされる37遺伝子に解析対象を絞り込んだ。さらに、次世代シークエンス解析結果の再現性を確認するため、各time pointで回収したマウス肝組織より再度mRNAを抽出し、real time PCRを実施した。その結果、約70%の遺伝子において再現性が確認された。そこで、再現性が確認された遺伝子の機能について情報収集を行い、NK細胞や細胞傷害性T細胞の活性化に関与することが推定される遺伝子に解析対象を絞り、機能解析を開始した。