Intracellular signal transduction regulating necroptosis of cardiomyocytes

细胞内信号转导调控心肌细胞坏死性凋亡

• 批准号: 21K08035
• 负责人: 三浦 哲嗣
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08035/
• 关键词: ネクロプトーシス; 細胞死; 細胞内シグナル伝達; 細胞内情報伝達; 心不全; 細胞骨格

１．ネクロプトーシスシグナルによるMLKLの核移行とネクロプトーシスとの関連：心筋症モデルマウスであるデルタサルコグリカン欠損マウスに認められるリン酸化MLKLの核移行の意義を解明のため、H9c2細胞を用いて検討した。その結果、ネクロプトーシスシグナル起動によってリン酸化MLKLは経時的に核にRan/importin 経路を介して移行し、その核移行はRIP1活性依存性であること、MLKLの核外移行シグナルは280-284アミノ酸領域に存在し、この領域の変異によって核内リン酸化MLKLレベルは上昇し、細胞死が増加することを明らかにした。この核内リン酸化MLKLよる細胞死は、RIP1、RIP3のいずれの活性にも依存していなかった。これらの結果より、核内リン酸化MLKLは細胞膜障害を誘導する細胞質リン酸化MLKLとは独立したネクロプトーシス促進機序であることが示唆された。２．ネクロプトーシスシグナル起動による心筋介在版の形態変化と介在版構成蛋白の変化：免疫組織染色用に市販されているデスミン、デスモグレリン-2、カドヘリン、RIP1, RIP3それぞれに対する複数の抗体の特異性を心筋を含めた複数のマウス臓器で検討した。また、抗RIP1, 抗RIP3抗体の特異性については、L929細胞にネクロネクロプトーシスを誘導したサンプルのウェスタンブロットで解析した。検討した16種類の抗体のなかから、特異性に関する問題を確認した11種類を除外し、５種類について組織免疫染色の特異性を解析中である。なお、抗RIP1抗体では正常心筋組織が染色されなかったが、ウェスタンブロットでもRIP1蛋白はほとんど検出されないことから、ラット心筋とは異なりマウス心筋では生理的な条件ではRIP1の蛋白発現が低く、RIP1依存性のネクロネクロプトーシスを起こしにくい状態にあると推察された。

1. The relationship between MLKL nuclear migration and H9c2 cell proliferation. As a result, the nuclear Ran/impertin pathway of MLKL during the initiation phase of MLKL cycling was transited, and the nuclear migration was dependent on RIP1 activity. The nuclear Ran/impertin pathway of MLKL during the initiation phase of MLKL cycling was transited, and the nuclear Ran/impertin pathway of MLKL during the initiation phase of MLKL cycling was transited, and the nuclear Ran/impertin pathway of MLKL during the initiation phase of MLKL cycling was transited. The activity of MLKL is dependent on the activity of RIP1 and RIP3. The results showed that intracellular MLKL could induce cell membrane damage, and that cytoplasmic MLKL could promote cell membrane damage independently. 2. Morphological changes of the protein in the protein. The specificity of anti-RIP1 and anti-RIP3 antibodies was analyzed in L929 cells. 16 types of antibodies were examined, and specificity issues were identified, except for 11 types of antibodies, and specificity issues were analyzed for 5 types of antibodies. Anti-RIP 1 antibodies are detected in normal tissue by staining and expression of RIP1 protein under physiological conditions.

项目成果

Enhanced nuclear localization of MLKL promotes necroptosis of cardiomyocytes and predicts prognosis in dilated cardiomyopathy.

MLKL 增强的核定位可促进心肌细胞坏死性凋亡并预测扩张型心肌病的预后。

• 发表时间: 2023
• 作者: YanoT;Fujita Y;Ino S;Ohwada W;Kouzu H;Kuno A;Tanno M;Furuhashi M;Miura T.
• 通讯作者: Miura T.

Involvement of necroptosis in contrast-induced nephropathy in a rat CKD model

• DOI: 10.1007/s10157-021-02048-1
• 发表时间: 2021-03
• 期刊: Clinical and Experimental Nephrology
• 影响因子: 2.3
• 作者: Satoru Shibata;Norihito Moniwa;A. Kuno;Ayumu Kimura;W. Ohwada;H. Sugawara;Yufu Gocho;Marenao Tanaka;T. Yano;M. Furuhashi;M. Tanno;T. Miki;T. Miura

Nuclear translocation of MLKL enhances necroptosis by a RIP1/RIP3-independent mechanism in H9c2 cardiomyoblasts.

MLKL 的核转位通过 RIP1/RIP3 独立机制增强 H9c2 心肌细胞中的坏死性凋亡。

• DOI: 10.1016/j.jphs.2022.12.009
• 发表时间: 2023
• 期刊: Journal of Pharmacological Sciences
• 影响因子: 3.5
• 作者: Ino S;Yano T;Kuno A;Tanno M;Kouzu H;Sato T;Yamashita T;Ohwada W;Osanami A;Ogawa T;Toda Y;Shimizu M;Miura T.
• 通讯作者: Miura T.