ハイドロゲルによるがん幹細胞誘導システムによる悪性中皮腫の幹細胞マーカーの同定

初年度(令和3年度)では、DN(dobule network) gel を用いる幹細胞性誘導により、悪性中皮腫の幹細胞マーカーの候補となる3遺伝子を同定した。2年目となる令和4年度では、候補遺伝子の機能解析を進めた。また、北大医学研究院腫瘍病理学教室において、DN gel以外のハイドロゲルであるPCDME (poly(N-carboxmethyl-N, N-dimethyl-2-methacryloyloxy ethanaminium))、PNaSS (poly(sodium p-styrene sulfonate))による幹細胞性誘導の有用性を示す結果が出ていることを受け、本研究でもPCDMEとPNaSSを検討することにした（これらのハイドロゲルの使用の可能性は当初より予定していた）。候補遺伝子の解析に関して、蛋白発現をウエスタンブロット法を用いて検討したが、対照として用いたHepG2細胞よりも蛋白質発現が少なく、またハイドロゲルによる発現増加は明らかではなかった。定常状態では発現が少ない蛋白質である可能性があるため、こられの蛋白質の過剰発現株を作成して機能解析を進める方針とした。腫瘍増殖能を検討する目的で、通常培養またはハイドロゲル上で培養した細胞をマウスの皮下に移植したが、有意な差が見られなかった。培養条件や移植方法を引き続き検討する。PCDME、PNaSSの検討に関しては、悪性中皮腫の細胞株（Meso-4）をハイドロゲル上で培養すると、集塊を形成せずに細胞がハイドロゲルに接着した状態で増殖した。SOX2、NANOG、OCT3/4のmRNAをqPCR法で調べると、これらの発現増加が確認できた。また幹細胞マーカーの候補遺伝子として同定した3遺伝子の発現増加も確認した。PCDME, PNaSSも悪性中皮腫の癌幹細胞誘導に有用である可能性があり、引き続き検討を続ける。

初年度(令和3年度)では、DN(dobule network) gel を用いる幹細胞性誘導により、悪性中皮腫の幹細胞マーカーの候補となる3遺伝子を同定した。2年目となる令和4年度では、候補遺伝子の機能解析を進めた。また、北大医学研究院腫瘍病理学教室において、DN gel以外のハイドロゲルであるPCDME (poly(N-carboxmethyl-N, N-dimethyl-2-methacryloyloxy ethanaminium))、PNaSS (poly(sodium p-styrene sulfonate))による幹細胞性誘導の有用性を示す結果が出ていることを受け、本研究でもPCDMEとPNaSSを検討することにした（これらのハイドロゲルの使用の可能性は当初より予定していた）。候補遺伝子の解析に関して、蛋白発現をウエスタンブロット法を用いて検討したが、対照として用いたHepG2細胞よりも蛋白質発現が少なく、またハイドロゲルによる発現増加は明らかではなかった。定常状態では発現が少ない蛋白質である可能性があるため、こられの蛋白質の過剰発現株を作成して機能解析を進める方針とした。腫瘍増殖能を検討する目的で、通常培養またはハイドロゲル上で培養した細胞をマウスの皮下に移植したが、有意な差が見られなかった。培養条件や移植方法を引き続き検討する。PCDME、PNaSSの検討に関しては、悪性中皮腫の細胞株（Meso-4）をハイドロゲル上で培養すると、集塊を形成せずに細胞がハイドロゲルに接着した状態で増殖した。SOX2、NANOG、OCT3/4のmRNAをqPCR法で調べると、これらの発現増加が確認できた。また幹細胞マーカーの候補遺伝子として同定した3遺伝子の発現増加も確認した。PCDME, PNaSSも悪性中皮腫の癌幹細胞誘導に有用である可能性があり、引き続き検討を続ける。