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マイクロ流体デバイスを用いたアプタマーの1分子スクリーニングシステムの開発

利用微流控装置开发适配子单分子筛选系统

基本信息

批准号：
08J09830
负责人：
杉野弘和
金额：
$ 0.77万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度に分子ソーターによる蛍光標識DNAの分離に成功した。本年度では分子ソーターの分離性能の評価を行い、問題点を検討し、アプタマーのスクリーニングに向けて分子ソーターの実験系を発展させた。分離前に10%程度の存在量であったDNAが分離後に30%程度まで濃縮されていることを確認した。分離システムのより詳細な性能評価を行う過程で、DNAの拡散とDNAの流路表面への吸着が、分離性能に悪い影響を与えていることが判明した。そのため、アプタマーのスクリーニングに取り組む前に、分子ソーターの実験系の改良に取り組んだ。流路形状を検討し、流路表面の化学修飾を施すことにより、改良前は30%程度までしか濃縮されなかったDNAが60%程度まで濃縮されるようになった[投稿準備中]。目的のアプタマーを探索するには、分離したサンプルをチップから回収して再び分離するというサイクルを繰り返すため、今回達成した1回あたりの分離性能の向上は、サイクル数の大幅な短縮につながり、アプタマーのスクリーニングを行う際のスループット向上につながる。結果として、分子ソーターの実験系の改良を行うことで、より実用性の高いDNAの分離システムが完成し、目的であるアプタマーのスクリーニングの現実性が増した。また、前年度に開発した多分岐型分離システムが論文に掲載された[雑誌論文1]。この分離システムはタンパク質のスクリーニングを行う実験系に応用する予定である。一方、多分岐型の分離システムを今まで取り組んできた並列型の分離システムに応用することで、並列型の性能向上にも成功した(投稿準備中)。この並列型分離システムは、将来、アプタマースクリーニングのスループット向上の取り組みの基礎技術となると考えている。

The molecular marker DNA was isolated successfully in the previous year. This year, the separation performance of the molecular system was evaluated, the problem point was discussed, and the molecular system was developed. The DNA was concentrated to 10% before isolation and 30% after isolation. Detailed performance evaluation of separation system, DNA dispersion, DNA adsorption on the surface of the flow path, separation performance, and identification of the effects The first step is to improve the quality of the product and to improve the quality of the product. The shape of the flow path is discussed, and chemical modification of the surface of the flow path is applied. Before improvement, the DNA concentration is 30% and the DNA concentration is 60%.[Submission preparation] The purpose of this study is to improve the separation performance of the separation system. As a result, the improvement of the practical system of molecular biology has been carried out, and the practical and high-quality DNA isolation system has been completed, and the practicality of the functional analysis of DNA has been increased. In the past year, the development of multi-component separation system was reported in this paper [Paper 1]. The separation process is based on a set of parameters. The separation system of one-way and multi-way split type is now successfully selected for use in combination with the separation system of side-by-side split type (submission preparation). The basic technology of parallel separation system is discussed in detail.