肺腺がんオルガノイドによる薬物耐性克服の研究

利用肺腺癌类器官克服耐药性的研究

• 批准号: 21K08201
• 负责人: 北 賢二
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08201/
• 关键词: 肺がん; オルガノイド; 薬物耐性; オシメルチニブ

今年度はすでに樹立できたオルガノイドを用い、培養液中にオシメルチニブを添加することでオシメルチニブ耐性オルガノイド樹立を試みた。EGFR変異オルガノイドはオシメルチニブに対する感受性が著しく高く、また増殖が遅いため、耐性化するのに手間取っている。また、EGFR変異（exon 19 deletion + T790M）オルガノイドに発光遺伝子ルシフェラーゼ及び、蛍光遺伝子EGFPの（ELuc-EGFP）導入を試みた。遺伝子導入方法はエレクトロポレーション法を用いた。ELuc-EGFP遺伝子導入したオルガノイドをpuromycinでセレクションし、ELuc-EGFP遺伝子が組み込まれたオルガノイドを選別した。蛍光顕微鏡により蛍光を確認することで、ELuc-EGFP遺伝子を導入した肺がんオルガノイドが樹立できたことを確認した。さらにこのELuc-EGFP肺がんオルガノイドにオシメルチニブを添加し、オシメルチニブ耐性を維持していることも確認した。ELuc-EGFP遺伝子を導入したオルガノイド及び、遺伝子導入していないオルガノイドを、SHOマウス（重度複合免疫不全ヘアレスマウス）及びNOGマウス（超免疫不全マウス）皮下に移植し、生着するかどうか確認した。遺伝子導入していないオルガノイドは、前年度SHOマウス皮下に移植したが、今年度はさらに細胞数を増やし移植を試みたが、どちらも現段階で皮下に生着していない。

今年，我们试图通过使用已经建立的类器官向培养基中添加osimertinib来建立对osimertinib的耐药性。 EGFR突变类器官明显更容易受到osimertinib的影响，并且生长缓慢，使其具有抗药性。此外，我们尝试将发光基因荧光素酶和荧光基因EGFP（ELUC-EGFP）引入器官（外显子19删除 + T790M）。使用电穿孔进行基因转移方法。使用嘌呤霉素选择了用ELUC-EGFP基因转染的器官，并选择了具有ELUC-EGFP基因的类器官。通过使用荧光显微镜确认荧光，可以确认已建立了用Eluc-EGFP基因引入的肺癌类器官。此外，将Osimertinib添加到该Eluc-EGFP肺癌器官中，以确认维持osimertinib的耐药性。用ELUC-EGFP基因和非转染器官转染的类器官被皮下植入SHO小鼠（严重的免疫缺陷无毛小鼠）和NOG小鼠（超级免疫缺陷小鼠），以确认是否可以植入它们。前一年未转染的类器官被植入了SHO小鼠的皮肤下，但是今年我们试图增加细胞的数量并移植它们，但在此阶段，它们都没有植入皮肤下。