特異的抗体を用いた新規標的タンパク質分解誘導薬によるメラノーマ治療薬の開発に挑む

接受挑战，利用特定抗体，使用新型靶蛋白降解诱导剂开发黑色素瘤治疗方法

• 批准号: 21K08297
• 负责人: 矢澤 重信
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08297/
• 关键词: メラノーマ; PROTAC; ユビキチン化; プロテインノックダウン; ナノボディ; E3ユビキチンリガーゼ; 標的タンパク質分解誘導; ALFAタグ; FACS解析; 標的分子探索; タンパク質分解誘導薬; ユビキチン-プロテアソーム分解系

近年、ユビキチン-プロテアソーム系を利用したプロテインノックダウン法による標的タンパク質分解誘導薬(PROTAC)という新しいタイプの創薬研究が注目を集めている。本研究では標的分子に結合する低分子化合物に代わって、特異的な低分子化抗体(ナノボディ)を用いたプロテインノックダウンによる新規の標的タンパク質分解誘導薬の開発を目的とし、ナノボディ-E3ユビキチンリガーゼ融合タンパク質によるプロテインノックダウンの実証、ならびに各種E3ユビキチンリガーゼにおける標的タンパク質分解の有効性の比較検証による最適化を行う。これに基づき、効果的な治療法の確立が急務となっている難治癌の一つである悪性黒色腫(メラノーマ)を対象とした治療薬の開発を目指し、メラノーマにおける標的タンパク質の探索とそのプロテインンノックダウンの実証によるメラノーマ治療薬の開発に挑戦する。 ヒトは600種類以上のE3ユビキチンリガーゼを持つと推定されており、比較検証用として12種のユビキチン化ドメインとナノボディの融合タンパク質発現コンストラクトを用意した。蛍光レポーターを発現する培養細胞株にこれら検証用コンストラクトを強制発現し、蛍光強度の減少を指標としてプロテインノックダウンの有効性の検証を行った。またメラノーマにおけるプロテインノックダウンの標的分子としてMitfと活性型BrafおよびNrasに注目し、これらの分子を特異的に認識するナノボディーを得るためのナノボディライブラリのスクリーニングを進めている。また、ナノボディーとE3ユビキチンリガーゼの融合タンパク質をメラノーマ細胞に発現させるための手法としてSelf-amplifing mRNAをナノパーティクルに封入しトランスフェクションする手法の構築を進めている。

In recent years, ユ ビ キ チ ン - プ ロ テ ア ソ ー を ム department use し た プ ロ テ イ ン ノ ッ ク ダ ウ ン method に よ る mark タ ン パ ク qualitative decomposition induced 薬 (PROTAC) と い う new し い タ イ プ の chong が 薬 research attention を め て い る. This study で に は target molecules combine す る に generation of low molecular compounds わ っ て, specific な low molecular antibody (ナ ノ ボ デ ィ) を with い た プ ロ テ イ ン ノ ッ ク ダ ウ ン に よ る new rules の mark タ ン パ ク qualitative decomposition induced 薬 の open 発 を purpose と し, ナ ノ ボ デ ィ - E3 ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ fusion タ ン パ ク qualitative に よ る プ ロ テ イ ン ノ ッ ク ダ ウ ン の be certificate, な ら び に various E3 ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ に お け る mark タ ン パ ク qualitative decomposition の have sharper sex の is 検 card に よ る optimization う を line. こ れ に base づ き, unseen fruit の な therapy establish が because と な っ て い る refractory cancer の a つ で あ る 悪 sex is black color is swollen (メ ラ ノ ー マ) を like と seaborne し た treatment 薬 の open 発 を refers し, メ ラ ノ ー マ に お け る mark タ ン パ ク qualitative の explore と そ の プ ロ テ イ ン ン ノ ッ ク ダ ウ ン の card be に よ る メ ラ ノ ー マ treatment 薬 の open 発 に pick 戦 す る . More than 600 kinds ヒ ト は の E3 ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ を hold つ と presumption さ れ て お り, comparative 検 card と し て 12 の ユ ビ キ チ ン change ド メ イ ン と ナ ノ ボ デ ィ の fusion タ ン パ ク qualitative 発 now コ ン ス ト ラ ク ト を intention し た. 蛍 light レ ポ ー タ ー を 発 now す る culture cell lines に こ れ ら 検 card コ ン ス ト ラ ク ト を forced 発 し now, 蛍 light intensity の reduce を index と し て プ ロ テ イ ン ノ ッ ク ダ ウ ン の have sharper sex の 検 line card を っ た. ま た メ ラ ノ ー マ に お け る プ ロ テ イ ン ノ ッ ク ダ ウ ン の target molecules と し て Mitf と type activated Braf お よ び Nras に attention し, こ れ ら の molecular を specific に know す る ナ ノ ボ デ ィ ー を have る た め の ナ ノ ボ デ ィ ラ イ ブ ラ リ の ス ク リ ー ニ ン グ を into め て い る. ま た, ナ ノ ボ デ ィ ー と E3 ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ の fusion タ ン パ ク qualitative を メ ラ ノ ー マ cells に 発 now さ せ る た め の gimmick と し て Self - amplifing mRNA を ナ ノ パ ー テ ィ ク ル に し sealed ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン す る gimmick の build を into め て い る.