全身性強皮症におけるTLR7およびTLR9の役割についての解析

TLR7和TLR9在系统性硬化症中的作用分析

基本信息

批准号：
21K08320
负责人：
小林忠弘
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度、改めて検体数を増やしてブレオマイシン誘発強皮症モデルにおける皮膚硬化および肺線維化の評価を行った。8-10週齢の野生型マウス（Balb/c）、Toll-like receptor (TLR)7欠損マウス、TLR9欠損マウスの背部皮下にそれぞれブレオマイシン溶液（1mg/mL）300μLを4週間、隔日で皮下注射した。その後にそれぞれのマウスの皮膚および肺組織を採取し、Hematoxylin-Eosin染色、Masson Trichrome染色にて線維化の程度を評価した。皮膚の線維化に関しては、野生型マウスとTLR7欠損マウスの間に有意差はなかったが、TLR9欠損マウスでは野生型マウスおよびTLR7欠損マウスに比べ有意に悪化がみられた。肺の線維化に関しては、野生型マウスとTLR9欠損マウスの間に有意差はなかったが、TLR7欠損マウスでは野生型マウスに比べ有意に線維化の程度が軽度であった。このように、ブレオマイシン誘発強皮症モデルにおける検討では、皮膚に関してはTLR9欠損マウスで線維化の増悪がみられ、肺に関してはTLR7欠損マウスで線維化の軽減がみられた。さらに、ブレオマイシン誘発強皮症モデルマウスの脾臓を用いて制御性T細胞、Th17細胞、制御性B細胞、エフェクターB細胞の割合をフローサイトメトリーで解析した。この結果、TLR7欠損マウスでは制御性T細胞の割合が野生型マウスおよびTLR9欠損マウスよりも増加していた。Th17細胞・制御性B細胞・エフェクターB細胞に関しては、野生型マウス・TLR7欠損マウス・TLR9欠損マウスの間に有意差はみられなかった。

今年，我们再次增加了标本的数量，以评估博来霉素诱导的硬皮病模型中的皮肤刚度和肺纤维化。在8-10周大的野生型小鼠（BALB/C），TOLL-样受体（TLR）7缺陷型小鼠和TLR9缺乏的小鼠中，每隔一天地皮下注入300μL的博来霉素溶液（1 mg/mL），持续4周，在4周内注射4周。然后收集来自每只小鼠的皮肤和肺组织，并使用苏木精 - 欧洲蛋白染色和Masson Trichrome染色评估纤维化程度。在皮肤纤维化方面，野生型和TLR7缺陷的小鼠之间没有显着差异，但是与野生型和TLR7缺陷型小鼠相比，TLR9缺陷的小鼠显着恶化。关于肺纤维化，野生型小鼠和TLR9缺陷型小鼠之间没有显着差异，但是在TLR7缺陷型小鼠中，纤维化程度明显比野生型小鼠明显较小。因此，在对博来霉素诱导的硬皮病模型的研究中，在皮肤中TLR9缺陷小鼠中观察到纤维化的恶化，并且在肺中TLR7缺陷小鼠中观察到纤维化的减少。此外，使用流式细胞仪分析了调节性T细胞，Th17细胞，调节B细胞和效应B细胞的比例，并使用博来霉素诱导的硬化症模型小鼠的脾脏进行分析。结果，与野生型小鼠和TLR9缺陷小鼠相比，TLR7缺乏小鼠的调节T细胞的比例增加。关于Th17细胞，调节B细胞和效应B细胞，野生型小鼠，TLR7缺陷型小鼠或TLR9缺陷小鼠之间未发现显着差异。