Dissection of innate immune pathogenesis of SLE by identifying novel hydroxychloroquine's mode of action

通过鉴定新型羟氯喹的作用模式剖析 SLE 的先天免疫发病机制

• 批准号: 21K08480
• 负责人: 河野 肇
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08480/
• 关键词: ヒドロキシクロロキン; NETs; ミトコンドリア; 好中球; SLE

(1) 細胞死による炎症反応の分子機構、特にインフラマソーム形成の分子機構の解明。 細胞死、特にネクローシスはインフラマソーム活性化をもたらす。インフラマソーム活性化、もしくは抑制制機構を発見するために、今回2種類の方法でライブ ラリースクリーニングを行うこととし、アッセイに必用な系を構築済した。a) レトロウイルスライブラリー法 安定的にASC-Cerulean発現するマクロファージ セルラインRAW264.7細胞を樹立した。この細胞は、LPS+ATPなどの刺激によりインフラマソーム活性化をきたし、細胞質に一様に存在していた分子が一ヶ所に集 まりspeckleを形成する。 さらに、ecotropic retrovirus receptorを遺伝子導入してあり、通常難しいレトロウイルスによるマクロファージへの遺伝子導入が ほぼ100%容易にできる。マクロファージより採取したmRNAを用いてレトロウイルスライブラリーを作成し、ASC-Cerulean発現RAW264.7細胞に感染させた後、イン フラマソーム活性化刺激を行う。インフラマソーム活性化はパイロプトーシスという細胞死を導くため、刺激後に生存し、増殖してくる細胞を分離して、そこに 発現しているレトロウイルスライブラリー由来の分子を同定することにより、インフラマソーム抑制性分子が同定される。またその逆に、リアルタイムでインフ ラマソーム活性化を観察できる利点を生かして、インフラマソーム活性化因子の同定を行う。

(1) Cell death による inflammation counteractivates 応 <s:1> molecular structure, に に <s:1> フラ ソ ソ ム ム ム form <s:1> molecular structure <e:1> explanation. Cell death, special にネ フラ ロ シス シス シス <s:1> <s:1> フラ ソ ソ ム ム ム activation を ロ たらす. イ ン フ ラ マ ソ ー ム activeness, も し く は restrain institution を 発 see す る た め に, today back to 2 kinds の way で ラ イ ブ ラ リ ー ス ク リ ー ニ ン グ を line う こ と と し, ア ッ セ イ に will build with な department を 済 し た. A) レ ト ロ ウ イ ル ス ラ イ ブ ラ リ ー method to settle the に ASC - Cerulean 発 now す る マ ク ロ フ ァ ー ジ セ ル ラ イ ン を RAW264.7 cells establish し た. こ は の cells, LPS + ATP な ど の stimulus に よ り イ ン フ ラ マ ソ ー ム activeness を き た し, cytoplasm に others に exist し て い molecules た が ヶ に set by ま り speckle を form す る. さ ら に, ecotropic retrovirus receptor を posthumous son 伝 import し て あ り, usually し い レ ト ロ ウ イ ル ス に よ る マ ク ロ フ ァ ー ジ へ の posthumous son 伝 import が ほ ぼ 100% easy に で き る. マ ク ロ フ ァ ー ジ よ り take し た mRNA を with い て レ ト ロ ウ イ ル ス ラ イ ブ ラ リ ー を make し, ASC - Cerulean 発 now RAW264.7 cells に infection さ せ た, イ ン フ ラ マ ソ ー を line う ム activeness stimulation. イ ン フ ラ マ ソ ー ム activeness は パ イ ロ プ ト ー シ ス と い う cell death を guide く た め, stimulating に survival し, raised after colonization し て く る を isolated し て, そ こ に 発 now し て い る レ ト ロ ウ イ ル ス ラ イ ブ ラ リ ー origin を の molecules with fixed す る こ と に よ り, イ ン フ ラ マ ソ ー ム が inhibitory molecules with fixed さ れ る. ま た そ の inverse に, リ ア ル タ イ ム で イ ン フ ラ マ ソ ー ム activeness を 観 examine で き る tartness を raw か し て, イ ン フ ラ マ ソ ー ム activation factor の う set を row.