Elucidation of the control mechanism of leptin signal transduction by hypothalamic heparan sulfate

阐明下丘脑硫酸乙酰肝素对瘦素信号转导的控制机制

• 批准号: 21K08588
• 负责人: 永井 尚子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08588/
• 关键词: ビオチンクロスリンカー標識ヘパリン; ビオチン化タンパク質; レプチンシグナル伝達; へパラン硫酸; 視床下部; エネルギー代謝; レプチン; ヘパラン硫酸

哺乳類の中枢神経系にある視床下部は、エネルギーの摂取と消費のバランスを保つために精巧な制御機構を発達させてきた。その中でもレプチンシグナルは、エネルギーバランスに対する反応の仲介役として中心的な役割を担っている。報告者らは、主に細胞表面や細胞間隙に存在する硫酸化糖鎖の一種であるへパラン硫酸の存在がレプチンシグナルに関与することを見出した。ヘパリンとレプチン受容体の相互作用が関与するかどうかを検討するために、2022年度において酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）と、細胞表面でのビオチンクロスリンク実験を行い、ヘパリンとレプチン受容体が相互作用する可能性を検討した。へパラン硫酸に構造が類似しているヘパリンにレプチンが結合するかどうかをELISAで確認しようと考えたが、大腸菌に発現させたレプチン受容体はレプチンとの結合を示さなかったため、レプチン受容体が正しい高次構造をとっていないと判断しELISA実験は行わなかった。ヘパリンとレプチン受容体が相互作用する可能性を検討するための代替実験として、レプチン受容体を発現するNeuro2A細胞にビオチンクロスリンカー標識ヘパリンを反応させ、レプチン受容体へのヘパリン結合を検討した。ビオチンクロスリンカー標識ヘパリンを反応させた細胞を蛍光色素で標識したストレプトアビジンで染色すると、蛍光強度の上昇を示したため、細胞表面がビオチン化されていると考えられた。さらに、ウェスタンブロッティングでは、ビオチンクロスリンカー標識ヘパリンで処理した細胞抽出液において、より多くのビオチン化タンパク質のバンドが検出された。報告者は今後、ビオチン標識されたタンパク質を濃縮精製した後、ウエスタンブロットを行うことにより細胞表面上でのヘパリンとレプチン受容体の相互作用を検討する。さらに、Hs6st2 koマウス脳における蛍光レプチン取り込みを多光子顕微鏡で観察する。

Mammalian central nervous system, lower part of the visual bed, the development of sophisticated control mechanisms In the middle of the game, there is a lot of work to be done. The reporter reported that the presence of sulfated glycans on the surface of the host cell and in the intercellular space was related to the presence of sulfuric acid. In 2022, the enzyme binding immunosorbent assay (ELISA) will be used to investigate the interaction between the two receptors, and the possibility of interaction between the two receptors will be discussed. The structure of sulfuric acid is similar to that of sulfuric acid. The structure of sulfuric acid is similar to that of sulfuric acid. To discuss the possibility of interaction between receptors and receptors. To discuss the possibility of interaction between receptors and receptors. To discuss the possibility of interaction between receptors and receptors. The color of the cell surface changes with the color of the cell surface. In addition, it can be used to treat cell extract, and it can be used to treat cell extract. The reporter will discuss the interactions between receptors on cell surfaces after purification and concentration of the substance. 6st 2nd 2nd