Significance of neutrophil extracellular traps in the formation of pre-metastatic niches by exosomes

中性粒细胞胞外陷阱在外泌体形成转移前生态位中的意义

• 批准号: 21K08602
• 负责人: 大西 康晴
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08602/
• 关键词: 好中球細胞外トラップ; エクソソーム; 肺転移; 腹膜播種; 好中球; 癌転移; 前転移ニッチ; 骨髄前駆細胞

マウス胃癌細胞YTN16をC57/BL6マウスの腹腔内に接種することを繰り返し、腹膜播種高転移株YTN16Pを作成した。これらの細胞株の培養上清から超遠心法を用いてエクソソームを分離、抽出し、カゼイン腹腔内投与後に腹腔内に滲出した好中球を分離し、それに添加して細胞膜非透過性核酸検出試薬SYTOXで染色してNETs誘導性を測定したところ、YTN16P由来のエクソソーム添加群でNETsの産生が有意に上昇することが確認できた。また、マウス大腿骨から採取した骨髄細胞に添加、4～24時間培養し、同様の方法でNETsを作成したところ、TN16P由来のエクソソーム添加群でNETsの産生が若干上昇する傾向が認められた。YTN16と亜株YTN16pL6マウスの腹腔内に接種し作成した腹膜播種巣から組織切片を作成し、抗 Gr1抗体で好中球を NETs をシトルリン化ヒストン３ (Cit H3) に対する抗体で免疫染色を行ったところ、YTN16PにてGr-1(+)好中球とCit H3(+)のNETsの密度が多く、CD8(+)T細胞は少ない傾向を認めた。また、ヒト大腸癌患者267例において53名(19.9%)が手術時メトホルミンを服用していたが、メトホルミン内服群におけるCD66b(+)好中球の密度は非内服群よりも有意に低く(100.0（34-322）/0.25mm2 vs 169.0（36-553）/0.25mm2 p <0.001）、CD66b(+)CitH3(+)のNETｓの密度もメトホルミン内服群は非内服群と比較して有意に低かった(20.0（0-104）/0.25mm2 v vs 36.0（8-272）/0.25mm2 v, p <0.001）。

重复将小鼠胃癌细胞YTN16 YTN16 YTN16重复，以产生腹膜种子的高转移性菌株YTN16P。通过超低分化从这些细胞系的培养上清液中分离并提取外生体，并在酪蛋白腹膜内施用后分离渗入腹膜腔的中性粒细胞分离，并添加到中性粒细胞中，并渗入腹腔内的中性粒细胞中，并在腹膜上进行了测定，并在腹膜上进行了测定，并构成了细胞植物的分泌症状，并呈现膜膜膜膜化的植物症状，并呈现膜膜膜的膜片，网。已经证实，该组增加了YTN16P外泌体的净产生的产量显着增加。此外，当将净添加到从小鼠股骨中收集的骨髓细胞中，培养4至24小时，并使用相同的方法制备网，并且趋势趋于略有增加该组的网中的网络产生，这些净产生添加到TN16P的外泌体中。 Tissue sections were prepared from peritoneal seed fossas created by inoculating YTN16 and sub-strain YTN16pL6 mice inoculated into the peritoneal cavity, and when neutrophils were immunostained with anti-Gr1 antibody, NETs were immunostained with antibodies against citrullinated histone 3 (Cit H3), YTN16P showed a higher density of Gr-1(+)中性粒细胞和CIT H3（+）网和CD8（+）T细胞往往很小。此外，在手术时接受二甲双胍的267例患者中有53（19.9％），但是口服二甲双胍组的CD66b（+）中性粒细胞的密度明显低于非奥尔特尔二甲双胍组的CD66b（+）中性粒细胞（100.0（100.0）（100.0口服二甲双胍组的净密度也明显低于非口腔二甲双胍组（20.0（0-104）/0.25mm2 vs 36.0（8-272）/0.25mm2 vs，p <0.001）。

项目成果

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【肝胆胰】胃肠移植医疗现状及未来展望 团队医疗肝移植现状及未来展望

• 发表时间: 2022
• 作者: 大西 康晴;佐久間 康成;眞田 幸弘;岡田 憲樹;平田 雄大;堀内 俊男;大豆生田 尚彦;水田 耕一;佐田 尚宏.
• 通讯作者: 佐田 尚宏.