心停止肝に対する、酸素化灌流とMuse細胞移植を融合した臓器修復再生法の開発

正常肝のラット20％過小グラフト移植モデルを作成し、こちらにヒトMuse 細胞および間葉系幹細胞（MSC)のブースト細胞移植モデルを付加する研究を継続した。ブースト移植細胞数を、MSC40万個、Muse40万個、MSC500万個（MSC500万個中にMuse40万が存在すると想定できる）で比較検討を継続した。過小グラフト肝移植＋ブースト細胞移植のモデルは既に当科で確立されているため、生存率には有意差が出なかったのは報告済である。しかし肝再生速度と肝代謝能力（ICG検査）の検討にてMuse40万個移植群は他群に比し有意にICG消失率が良好であった。ICG検査が、MSC500万群で改善が不十分なのにMuseだけ改善した理由として、肝臓内の血流が改善した可能性を考え（MSC500万群では細胞数が多すぎてかえって類洞閉塞した可能性を考えた）、臓器透明化技術を用いて肝類洞画像を撮影した。術後3日目のラットに蛍光標識デキストランを注射し、肝臓を摘出後、4%PFAにて浸漬固定。そのごCUBIC protocolを用い肝臓を透明化し多光子共焦点レーザー顕微鏡にて3次元類洞画像を撮影。ImageJによる連続した平均類洞体積・表面積測定にて、類洞の開存性および連続性がMuse細胞40万投与でMSCに比し有意に改善していることが解った。さらに、Muse細胞はMSCと比較してHGF、VEGFAを高発現していることが新たに分かった。このためMuse細胞の類洞保護効果がHGFやVEGFAによるものと想定できた。心停止ドナー肝グラフトに酸素化灌流を施行する類洞保護モデルもラットとブタで確立した。ラットにて心停止ドナー無処置再灌流群と酸素化後の再灌流群で比較研究を開始した。また酸素化後の再灌流時に細胞ブーストを行う実験モデルも確立した。

正常肝のラット20％過小グラフト移植モデルを作成し、こちらにヒトMuse 細胞および間葉系幹細胞（MSC)のブースト細胞移植モデルを付加する研究を継続した。ブースト移植細胞数を、MSC40万個、Muse40万個、MSC500万個（MSC500万個中にMuse40万が存在すると想定できる）で比較検討を継続した。過小グラフト肝移植＋ブースト細胞移植のモデルは既に当科で確立されているため、生存率には有意差が出なかったのは報告済である。しかし肝再生速度と肝代謝能力（ICG検査）の検討にてMuse40万個移植群は他群に比し有意にICG消失率が良好であった。ICG検査が、MSC500万群で改善が不十分なのにMuseだけ改善した理由として、肝臓内の血流が改善した可能性を考え（MSC500万群では細胞数が多すぎてかえって類洞閉塞した可能性を考えた）、臓器透明化技術を用いて肝類洞画像を撮影した。術後3日目のラットに蛍光標識デキストランを注射し、肝臓を摘出後、4%PFAにて浸漬固定。そのごCUBIC protocolを用い肝臓を透明化し多光子共焦点レーザー顕微鏡にて3次元類洞画像を撮影。ImageJによる連続した平均類洞体積・表面積測定にて、類洞の開存性および連続性がMuse細胞40万投与でMSCに比し有意に改善していることが解った。さらに、Muse細胞はMSCと比較してHGF、VEGFAを高発現していることが新たに分かった。このためMuse細胞の類洞保護効果がHGFやVEGFAによるものと想定できた。心停止ドナー肝グラフトに酸素化灌流を施行する類洞保護モデルもラットとブタで確立した。ラットにて心停止ドナー無処置再灌流群と酸素化後の再灌流群で比較研究を開始した。また酸素化後の再灌流時に細胞ブーストを行う実験モデルも確立した。