バイオ人工臓器研究における(膜型)レクチンの制御機能の利用

(膜型)凝集素的调节功能在生物人工器官研究中的利用

基本信息

  • 批准号:
    21K08665
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.66万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    2021
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2021-04-01 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

肺胞サーファクタントSP-Aに目をつけ、そのCRD(糖鎖認識部位)部分を膜型レクチンの一つであるCL-1のCRDに置き換え、pCXN2-Vectorのcloning siteに挿入、pCXN2/CL-SP-Aを作成し、FACSでその発現を確認した。前回はヒトmonocyte/macrophageのcell lineであるTHP-1を使い、ブタ血管内皮細胞(SEC)に対する障害率を検討した。今回はヒト抹消血からの顆粒球(PBMC)を取り出し、M-CSF(100ng/mL)を加え5日間培養しmacrophageに誘導した後、FACSにてCD14の発現を確認し、同時にSIRPaの発現を検証した。CL-SP-Aによるphagocytosis(貪食)に対する抑制効果を検討した。SECに対するヒトmacrophageの貪食率は約75%であったのに対し、SEC/CL-SP-Aに対しては約30%以下の値を示した。また、続いてROS産性能を検討した、SECの場合を100%とすると、SEC/CL-SP-Aでは約75%程度に落ちていた。さらに、反応の際のmacrophageでのサイトカイン産性能についてはmRNAを取りrt-PCR法で測定した、SEC/CL-SP-Aに対する場合は、SECに対する場合と比べて、IL-1bの産生に変化は示さなかったが、TNF-aやiNOS/Arg1は有意に下がっていた。一方、IL-10は有意に上昇していた。加えて、THP-1 Lucia NFkB細胞を用いて細胞障害を測定したが、SEC/CL-SP-AではSECに比してやはり有意にNF-kB遺伝子発現がおさえられていた。これらの事から、hybrid分子CL-SP-AがmacrophageのSECに対する攻撃の際、その抑制に有効であることが証明された。
The CRD of CL-1 was replaced by a membrane type CRD, the cloning site of pCXN2-Vector was inserted, pCXN2/CL-SP-A was created, and FACS was confirmed. In the past, the damage rate of THP-1 in monocyte/macrophage cell line was discussed. In the present study, the presence of CD14 was confirmed by FACS after 5-day culture with M-CSF(100ng/mL) and the presence of SIRPa was detected. CL-SP-A is a very effective way to control food consumption. SEC macrophage gluttony rate is about 75%, SEC/CL-SP-A is about 30% For SEC applications, ROS production performance is 100%, SEC/CL-SP-A is approximately 75%. In addition, the production of IL-1b, TNF-a and iNOS/Arg1 was determined by rt-PCR, SEC/CL-SP-A, SEC and other methods. One side, IL-10 intentionally rose. Add to cart, THP-1 Lucia NFkB cells in the middle of the cell damage assay, SEC/CL-SP-A SEC ratio, intentionally NF-kB gene development in the middle of the day The hybrid molecule CL-SP-A is proved to be an effective inhibitor of macrophage-related SEC attacks.

项目成果

期刊论文数量(11)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Suppression of xenogeneic innate immune response by a membrane-type human surfactant protein-A.
  • DOI:
    10.3892/etm.2022.11527
  • 发表时间:
    2022-07
  • 期刊:
  • 影响因子:
    2.7
  • 作者:
    Chiyoshi Toyama;A. Maeda;Shuhei Kogata;Riho Yamamoto;Kazunori Masahata;T. Ueno;Masafumi Kamiyama;Y. Tazuke;H. Eguchi;H. Okuyama;S. Miyagawa
  • 通讯作者:
    Chiyoshi Toyama;A. Maeda;Shuhei Kogata;Riho Yamamoto;Kazunori Masahata;T. Ueno;Masafumi Kamiyama;Y. Tazuke;H. Eguchi;H. Okuyama;S. Miyagawa
The suppression of macrophage-mediated intestinal transplant rejection by C5a receptor antagonist.
C5a 受体拮抗剂抑制巨噬细胞介导的肠移植排斥反应。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Chiyoshi Toyama;Akira Maeda;Shuhei Kogata;Koki Takase;Tasuku Kodama;Kazunori Masahata;Takehisa Ueno;Masafumi Kamiyama;Yuko Tazuke;Hiroshi Eguchi;Katsuyoshi Matsunami;Shuji Miyagawa;Hiroomi Okuyama
  • 通讯作者:
    Hiroomi Okuyama
CPISPR / Cas3 system for pig Gal-T (GGTA1)
猪 Gal-T (GGTA1) 的 CISPPR / Cas3 系统
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Shuji Miyagawa;Masahito Watanabe;Kazuki Sato;Shuhei Kogata;Chiyoshi Toyama;Kazunori Masahata;Masafumi Kamiyama;Hiroshi Eguchi;Akira Maeda;Kazuto Yoshimi;Tomoji Mashimo;Hiroomi Okuyama;Hiroshi Nagashima
  • 通讯作者:
    Hiroshi Nagashima
Effect of a C5a receptor antagonist on macrophage function in an intestinal transplant rat model
  • DOI:
    10.1016/j.trim.2022.101559
  • 发表时间:
    2022-03-21
  • 期刊:
  • 影响因子:
    1.5
  • 作者:
    Toyama,Chiyoshi;Maeda,Akira;Okuyama,Hiroomi
  • 通讯作者:
    Okuyama,Hiroomi
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2014
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    上野 豪久;山道 拓;梅田 聡;大割 貢;正畠 和典;奈良 啓悟;上原 秀一郎;大植 孝治;臼井 規朗
  • 通讯作者:
    臼井 規朗

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    2008
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    $ 2.66万
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