バイオ人工臓器研究における（膜型）レクチンの制御機能の利用

（膜型）凝集素的调节功能在生物人工器官研究中的利用

• 批准号: 21K08665
• 负责人: 正畠 和典
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08665/
• 关键词: Xenotransplantation; 糖鎖認識部位; SP-A; ブタ血管内皮細胞; 細胞障害率; 自然免疫系細胞; 膜型レクチン; 異種移植; Transgenicブタ; バイオ人工臓器

肺胞サーファクタントSP-Aに目をつけ、そのCRD(糖鎖認識部位)部分を膜型レクチンの一つであるCL-1のCRDに置き換え、pCXN2-Vectorのcloning siteに挿入、pCXN2/CL-SP-Aを作成し、FACSでその発現を確認した。前回はヒトmonocyte/macrophageのcell lineであるTHP-1を使い、ブタ血管内皮細胞(SEC)に対する障害率を検討した。今回はヒト抹消血からの顆粒球（PBMC）を取り出し、M-CSF(100ng/mL)を加え５日間培養しmacrophageに誘導した後、FACSにてCD14の発現を確認し、同時にSIRPaの発現を検証した。CL-SP-Aによるphagocytosis（貪食）に対する抑制効果を検討した。SECに対するヒトmacrophageの貪食率は約７５％であったのに対し、SEC/CL-SP-Aに対しては約３０％以下の値を示した。また、続いてROS産性能を検討した、SECの場合を１００％とすると、SEC/CL-SP-Aでは約７５％程度に落ちていた。さらに、反応の際のmacrophageでのサイトカイン産性能についてはmRNAを取りrt-PCR法で測定した、SEC/CL-SP-Aに対する場合は、SECに対する場合と比べて、IL-1bの産生に変化は示さなかったが、TNF-aやiNOS/Arg1は有意に下がっていた。一方、IL-10は有意に上昇していた。加えて、THP-1 Lucia NFkB細胞を用いて細胞障害を測定したが、SEC/CL-SP-AではSECに比してやはり有意にNF-kB遺伝子発現がおさえられていた。これらの事から、hybrid分子CL-SP-AがmacrophageのSECに対する攻撃の際、その抑制に有効であることが証明された。

The lung cells were infected with SP-A, CRD, membrane, CRD, pCXN2-Vector, cloning site, pCXN2/CL-SP-A, and FACS. In the previous monocyte/macrophage, cell line, THP-1, vascular endothelial cell (SEC), vascular endothelial cell (SEC), vascular endothelial cell, vascular endothelial cell and vascular endothelial cell. This time, after using PBMC to remove blood, and M-CSF (100ng/mL) to train macrophage after 5 days, FACS CD14 can confirm the error, and SIRPa will check it at the same time. CL-SP-A food phagocytosis (food) suppresses the fruit. The food intake rate of SEC and SEC/CL-SP-An is 75% and 30% respectively, and that of SEC/CL-SP-An is less than 30%. The performance of ROS, SEC and SEC/CL-SP-An is about 75%, 100% and 75% respectively. The results show that the performance is different, the performance is different, the mRNA is measured by the rt-PCR method, the SEC/CL-SP-An is tested, the SEC is combined, the IL-1b is used, and the TNF-an is intended to be tested. On the other hand, the IL-10 is interested in signing up for a visit. In addition, the THP-1 Lucia NFkB cell is used to determine the cell damage by using the cell barrier, and the SEC/CL-SP-A cell SEC is better than the NF-kB cell to detect the damage. The hybrid molecule CL-SP-A, macrophage, SEC, attacks the world, suppresses it, and makes it clear that it is not.

项目成果

Suppression of xenogeneic innate immune response by a membrane-type human surfactant protein-A.

• DOI: 10.3892/etm.2022.11527
• 发表时间: 2022-07
• 期刊: Experimental and therapeutic medicine
• 影响因子: 2.7
• 作者: Chiyoshi Toyama;A. Maeda;Shuhei Kogata;Riho Yamamoto;Kazunori Masahata;T. Ueno;Masafumi Kamiyama;Y. Tazuke;H. Eguchi;H. Okuyama;S. Miyagawa

The suppression of macrophage-mediated intestinal transplant rejection by C5a receptor antagonist.

C5a 受体拮抗剂抑制巨噬细胞介导的肠移植排斥反应。

• 发表时间: 2022
• 作者: Chiyoshi Toyama;Akira Maeda;Shuhei Kogata;Koki Takase;Tasuku Kodama;Kazunori Masahata;Takehisa Ueno;Masafumi Kamiyama;Yuko Tazuke;Hiroshi Eguchi;Katsuyoshi Matsunami;Shuji Miyagawa;Hiroomi Okuyama
• 通讯作者: Hiroomi Okuyama

CPISPR / Cas3 system for pig Gal-T (GGTA1)

猪 Gal-T (GGTA1) 的 CISPPR / Cas3 系统

• 发表时间: 2021
• 作者: Shuji Miyagawa;Masahito Watanabe;Kazuki Sato;Shuhei Kogata;Chiyoshi Toyama;Kazunori Masahata;Masafumi Kamiyama;Hiroshi Eguchi;Akira Maeda;Kazuto Yoshimi;Tomoji Mashimo;Hiroomi Okuyama;Hiroshi Nagashima
• 通讯作者: Hiroshi Nagashima

Effect of a C5a receptor antagonist on macrophage function in an intestinal transplant rat model

• DOI: 10.1016/j.trim.2022.101559
• 发表时间: 2022-03-21
• 期刊: TRANSPLANT IMMUNOLOGY
• 影响因子: 1.5
• 作者: Toyama，Chiyoshi;Maeda，Akira;Okuyama，Hiroomi
• 通讯作者: Okuyama，Hiroomi