肝虚血再灌流障害に対するセンスオリゴヌクレオチドを用いた新規核酸医薬の開発研究

有义寡核苷酸治疗肝缺血再灌注损伤新型核酸药物的研发

• 批准号: 21K08697
• 负责人: 奥山 哲矢
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08697/
• 关键词: センスオリゴヌクレオチド; 核酸医薬; 肝虚血再灌流障害; iNOS; 一酸化窒素; TNF-α; 誘導型一酸化窒素合成酵素; 非コードRNA

肝虚血再灌流障害が術後合併症の原因として問題となる拡大肝切除後のモデル確立を目指した。ラットに間欠的肝流入血流遮断の後、部分肝切除を行ってから再灌流し肝障害を誘導した（PM+PHラットモデル）。血流遮断の時間と再灌流後の残存肝のサンプリング時間について、iNOS遺伝子発現を指標に条件検討した。血流遮断の時間とサンプリングまで再灌流時間を決定した。確立されたPM+PHラットモデルに対し、ラット初代培養肝細胞にてiNOS アンチセンス転写物の誘導を抑制する薬剤のSulforaphaneおよびBaicaleinをラットに前投与し、障害後の肝臓組織、血液を採取した。肝虚血再灌流では、肝臓に過剰に血液が流入し肝重量が増加する。これらの薬剤を前投与することにより、虚血再灌流後にサンプリングした肝臓の重量の増加が抑制される傾向が得られたため、肝障害が緩和される可能性を示す結果が得られた。さらに、条件検討で得た複数の血流遮断時間と再灌流時間の条件下の肝臓サンプルのTotal RNAについて網羅的mRNA発現のマイクロアレイ解析を実施した。発現変動の大きい遺伝子を選出し、それら遺伝子のアンチセンス転写物の有無を確認し、センスオリゴを設計して標的の候補として検討する予定である。また、別の肝虚血再灌流障害が術後合併症の原因として問題となる肝移植のモデルであるIsolated Perfused Rat Liver装置を用いた移植肝モデル（IPRLモデル）において、臓器保存液に浸して一定時間保存した肝臓に対し、その門脈にiNOSのセンスオリゴを投与した。肝臓へ生理的緩衝液を灌流させて虚血再灌流障害を誘導し、臓器と灌流緩衝液を採取した。臓器における遺伝子発現や、灌流緩衝液への肝逸脱酵素活性を測定することで、肝障害に対するiNOSセンスオリゴの保護作用について解析を進めている。

Causes of postoperative complications due to hepatic insufficiency and reperfusion injury: a review of the causes and problems of postoperative complications after hepatectomy After partial hepatectomy, reperfusion is induced after intermittent hepatic inflow occlusion (PM+PH). Time of blood flow interruption, time of residual liver after reperfusion, and condition of iNOS gene expression were investigated. The time of blood flow interruption is determined by the time of reperfusion. To establish a method for inhibiting the induction of iNOS and Baicalein in primary cultured hepatocytes by using Sulforaphane and Baicalein as inhibitors before and after injection of iNOS and Baicalein. Liver deficiency reperfusion, liver dysfunction, blood inflow, liver weight increase The results showed that there was a tendency to increase liver weight after reperfusion. In addition, the analysis of mRNA expression in liver tissue under the condition of multiple blood flow occlusion time and reperfusion time was carried out. Select the candidate for the event, confirm the presence or absence of the candidate for the event, and determine the candidate for the event. The causes of postoperative complications due to different Liver ischemia and reperfusion disorders are discussed in this paper. The Isolated Rat liver device is used in liver transplantation. The liver is preserved in the preservation solution for a certain period of time. The physiological buffer solution of liver perfusion was used to induce reperfusion injury. The analysis of the protective effect of iNOS on liver injury was carried out by measuring the activity of liver escape enzymes in perfusion buffer solution.

项目成果

Hepatoprotective and anti-inflammatory profile of sokeikakketsuto and makyoyokukanto in primary cultured rat hepatocytes

sokeikakkettsuto 和 makyoyokukanto 在原代培养的大鼠肝细胞中的保肝和抗炎作用

• DOI: 10.31989/ffhd.v12i2.887
• 发表时间: 2022
• 期刊: Functional Foods in Health and Disease
• 影响因子: 1
• 作者: Sakaguchi Tatsuma;Okuyama Tetsuya;Kotsuka Masaya;Yoshida Terufumi;Okumura Tadayoshi;Nishizawa Mikio;Kaibori Masaki;Sekimoto Mitsugu
• 通讯作者: Sekimoto Mitsugu

Comparison of the anti-inflammatory activities of furanocoumarins from the roots of Angelica dahurica

• DOI: 10.31989/bchd.v4i12.866
• 发表时间: 2021-12
• 期刊: Bioactive Compounds in Health and Disease
• 作者: Ryo Okada;Hazuki Abe;T. Okuyama;Yuto Nishidono;Toshinari Ishii;Tatsuki Sato;Saki Shirako;Ken Tanaka;Y. Ikeya;M. Nishizawa

Detection of Decarboxylated Amino Acids after <i>in Vitro</i> Protease Digestion of the Hydrophilic Fraction of Crude Drug Extracts

生药提取物亲水部分体外蛋白酶消化后脱羧氨基酸的检测

• DOI: 10.1248/bpb.b21-00623
• 发表时间: 2022
• 期刊: Biological and Pharmaceutical Bulletin
• 影响因子: 2
• 作者: Shirako Saki;Sato Kenji;Moriwaki Saki;Ikeya Yukinobu;Nishizawa Mikio
• 通讯作者: Nishizawa Mikio

Bitter melon fruit extract enhances intracellular ATP production and insulin secretion from rat pancreatic β-cells.

苦瓜果实提取物可增强大鼠胰腺 β 细胞的细胞内 ATP 生成和胰岛素分泌。

• DOI: 10.1017/s0007114521001082
• 发表时间: 2022
• 期刊: British Journal of Nutrition
• 影响因子: 3.6
• 作者: Shimada T;Kato F;Dwijayanti R;Nagata T;Kinoshita A;Okuyama T;Nishizawa M;Mukai E
• 通讯作者: Mukai E