肝虚血再灌流障害に対するセンスオリゴヌクレオチドを用いた新規核酸医薬の開発研究

点击翻译按钮获取中文摘要

肝虚血再灌流障害が術後合併症の原因として問題となる拡大肝切除後のモデル確立を目指した。ラットに間欠的肝流入血流遮断の後、部分肝切除を行ってから再灌流し肝障害を誘導した（PM+PHラットモデル）。血流遮断の時間と再灌流後の残存肝のサンプリング時間について、iNOS遺伝子発現を指標に条件検討した。血流遮断の時間とサンプリングまで再灌流時間を決定した。確立されたPM+PHラットモデルに対し、ラット初代培養肝細胞にてiNOS アンチセンス転写物の誘導を抑制する薬剤のSulforaphaneおよびBaicaleinをラットに前投与し、障害後の肝臓組織、血液を採取した。肝虚血再灌流では、肝臓に過剰に血液が流入し肝重量が増加する。これらの薬剤を前投与することにより、虚血再灌流後にサンプリングした肝臓の重量の増加が抑制される傾向が得られたため、肝障害が緩和される可能性を示す結果が得られた。さらに、条件検討で得た複数の血流遮断時間と再灌流時間の条件下の肝臓サンプルのTotal RNAについて網羅的mRNA発現のマイクロアレイ解析を実施した。発現変動の大きい遺伝子を選出し、それら遺伝子のアンチセンス転写物の有無を確認し、センスオリゴを設計して標的の候補として検討する予定である。また、別の肝虚血再灌流障害が術後合併症の原因として問題となる肝移植のモデルであるIsolated Perfused Rat Liver装置を用いた移植肝モデル（IPRLモデル）において、臓器保存液に浸して一定時間保存した肝臓に対し、その門脈にiNOSのセンスオリゴを投与した。肝臓へ生理的緩衝液を灌流させて虚血再灌流障害を誘導し、臓器と灌流緩衝液を採取した。臓器における遺伝子発現や、灌流緩衝液への肝逸脱酵素活性を測定することで、肝障害に対するiNOSセンスオリゴの保護作用について解析を進めている。