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腫瘍血管内皮細胞のimmune set point制御スイッチとしての機能の解明

阐明肿瘤血管内皮细胞作为免疫设定点控制开关的功能

基本信息

批准号：
21K08891
负责人：
羽藤泰
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Saitama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

腫瘍血管内皮細胞の抗腫瘍免疫制御機構の解析を行っている。初年度にin vivo実験を行い、抗VEGFR2治療による抗腫瘍免疫応答の改変を確認し、二年目以降にin vitro実験でメカニズムを明らかとする計画である。本年度は、計画に従って、in vitroのモデルを中心に実験を実施した。C57BL/6Jマウスで作成したExLLC由来腫瘍を摘出し、単一細胞に分けたあと、これをスフェロイド培養に供した。血管内皮細胞をCD31磁気ビーズを用いて除去するものと、しないものに分け、通常大気と低酸素（１％O2)に分けて３日間培養を実施した。本研究ではVEGFR2の免疫制御スイッチとしての機構を解析するため、培養上清に抗VEGFR2抗体を添加し、培養上清でのINF-γ、IL-2発現をELSIAで定量し、腫瘍及び間質細胞でのPD-L1発現強度を免疫染色で定量した。低酸素下では単純なスフェロイド培養においては、IFN-γおよびIL-2の培養上清内での発現量は通常大気下での培養に比べてわずかに低下が見られたが統計学的な有意差には至らなかった。一方で、抗VEGFR2抗体を上清に添加し、低酸素下で同培養を実施すると、IFN-γ発現量はほぼ倍増し、IL-2発現も上昇する傾向が認められた。CD31ビーズを用いて血管内皮細胞を除去すると、VEGFR2由来のIFN-γ及びIL-2発現の上昇は観察されなかったことから、低酸素化での免疫応答活性が腫瘍血管内皮細胞由来のメカニズムであることが示された。途中経過は得られているが、学会発表および論文などでの成果発表には至らなかった。

Analysis of anti-tumor immune mechanism of tumor vascular endothelial cells In the first year, the anti-tumor immune response was confirmed in vivo, and in the second year, the anti-tumor immune response was confirmed in vitro. This year, the plan was implemented in the vitro center. C57BL/6J was created by ExLLC for cell culture. Vascular endothelial cells CD31 were cultured in vitro, usually at high concentrations and low concentrations (1%O2). In this study, we analyzed the mechanism of VEGFR-2 immunosuppression, added anti-VEGFR-2 antibody to culture supernatant, quantified INF-γ and IL-2 expression in culture supernatant by ELSIA, quantified PD-L1 expression intensity in tumor and stromal cells by immunostaining. The production of IFN-γ and IL-2 in culture supernatants at low concentrations was usually lower than that at high concentrations. In addition, anti-VEGFR-2 antibody was added to supernatant, and IFN-γ production and IL-2 production tended to increase under low pH conditions. CD31 protein expression in vascular endothelial cells was reduced by VEGFR-2, and IFN-γ and IL-2 expression in vascular endothelial cells was increased by VEGFR-2. On the way to the end of the year, we will learn how to make progress and how to make progress.