シュワン細胞脱分化機構の解明と未分化シュワン細胞誘導による末梢神経再生の研究

雪旺细胞去分化机制的阐明及诱导未分化雪旺细胞的周围神经再生研究

• 批准号: 21K09273
• 负责人: 平川 明弘
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09273/
• 关键词: 未分化Schwann細胞; 末梢神経再生; PI3K/Aktシグナル; Wnt /β-catenin シグナル; 末梢神経損傷; 脱分化; PI3K/Akt シグナル; Wnt/β-catenin シグナル

坐骨神経損傷後のシュワン細胞脱分化におけるPI3K/Aktシグナルの関与を解析するため、Schwann 細胞特異的遺伝子改変マウス：Sox10-CreERT2マウスとPten flox（gain of function）マウス、Rosa26-stop-Pten（loss of function）マウスを交配し、Sox10-CreERT2/Pten flox/floxおよび、Sox10-CreERT2/Rosa26-stop-Ptenを作製した。同様にWnt/β-cateninシグナルの関与を解析するため、Sox10-CreERT2マウスとβ-catenin ex3 flox（gain of function）、 β-catenin ex2-6 floxマウス（loss of function）を交配し、Sox10-CreERT2/β-catenin ex3 flox 、Sox10-CreERT2/β-catenin ex2-6 flox/floxを作製した。Sox10-CreERT2/Pten flox/floxマウスにタモキシフェンおよびcorn oil（コントロール）を投与後、坐骨神経損傷モデルを作製した。受傷後5日目、28日目に組織標本を作製し、分化シュワン細胞マーカー(Mbp)、未分化シュワン細胞マーカー（Ngfr）、軸索マーカー（TujI）による免疫染色を行った。その結果、シュワン細胞におけるPI3K/Aktシグナル亢進によって、シュワン細胞の脱分化が遅延することが示唆された。一方で、Sox10-CreERT2/Rosa26-stop-Ptenマウスにおいてはタモキシフェンを投与したが、Cre-LoxP反応が生じず、Ptenの過剰発現が誘導できなかった。また、Sox10-CreERT2/β-catenin ex3 floxマウスにタモキシフェンを投与したが、コントロール群と比較し、坐骨神経の再生には変化を認めなかった

To analyze the involvement of PI3K/Akt signals in Schwann cell dedifferentiation after sciatic nerve injury, Schwann cell-specific genetically modified mice: Sox10-CreERT2 mice, Pten flox (gain of function) mice, and Rosa26-stop-Pten (loss of function) mice were mated to generate Sox10-CreERT2/Pten flox/flox and SOX10-CREERT2/ROSA26-Stop-Pten。同样，为了分析Wnt/β-catenin信号的参与，将SOX10-CREERT2小鼠与β-catenin ex3 Flox（功能获得），β-catenin ex2-6 flox（功能丧失）和SOX10-CREERT2/β-catenin ex3 flox ex3 flox和Sox10-flox和Sox10-Creert2--exenin一起杂交。在给予他莫昔芬和玉米油（对照）到Sox10-Creert2/Pten Flox/Flox小鼠后，准备了坐骨神经损伤模型。在受伤后的第5天和第28天制备组织样品，并用分化的Schwann细胞标记（MBP），未分化的Schwann细胞标记（NGFR）和轴突标记物（TUJI）进行免疫染色。结果表明，Schwann细胞中PI3K/AKT信号的增加延迟了Schwann细胞的去分化。另一方面，他莫昔芬是在Sox10-Creert2/rosa26-Stop-pten小鼠中施用的，但没有发生CRE-LOXP反应，并且无法诱导PTEN过表达。此外，将他莫昔芬施用到​​Sox10-Creert2/β-catenin ex3 Flox小鼠中，但与对照组相比，坐骨神经再生未观察到任何变化。