The role of novel activating ligand of receptor tyrosine kinase in nerve regeneration mechanism

新型受体酪氨酸激酶激活配体在神经再生机制中的作用

• 批准号: 21K09297
• 负责人: 町野 正明
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09297/
• 关键词: 受容体型チロシンキナーゼ; 神経再生; 活性化リガンド

未分化リンパ腫キナーゼ（ALK）は、受容体型チロシンキナーゼ（RTK）ファミリーに属するI型膜貫通型タンパク質であり、その細胞内チロシンキナーゼ活性は、特定のリガンドによる受容体クラスタリングによって増強される。本研究は、コンドロイチン硫酸（CS）またはデルマタン硫酸（DS）など他のグリコサミノグリカン（GAG）がALKのリガンドであるかどうかを検証することを目的とした。表面プラズモン共鳴（SPR）分析にて、DSはN末端領域（NTR）のNTRとの有意な相互作用を示したが、他の硫酸化パターンを含むCSフォームは未分化リンパ腫キナーゼ（ALK）に結合しなかった。Western blotting法にてDS二糖（dp2）を除いて、DS四糖（dp4）より長いDSは、ALKの自己リン酸化を用量依存的に誘導し、ALKの活性化を促した。dp4より長いDSはALKの自己リン酸化を濃度依存的に誘導しALKを活性化した。ALKのNTRの重要性にさらに取り組むために、全長ALKとNTRを欠く短縮型ALK（ALKΔNTR）をHEK293T細胞に過剰発現させた。その後、細胞溶解物をビオチン結合DSと混合し、ストレプトアビジンでプルダウンした。ALKΔNTRはDSによってプルダウンされず、全長ALKはDSによって正常にプルダウンされた。これによりDSがALKのNTRの特異的リガンドであることを確認した。2.5μMのDS dp16および天然DSは、全長のALKを活性化したが、一貫してALKΔNTRの活性化を誘導できなかった。DSがALKの新しいリガンドであることが証明された。DSはALKのNTRと直接相互作用し、DS四糖はALKの活性化に十分な誘導能を示した。

Undifferentiated receptor type (ALK), receptor type (RTK). In this study, we investigated the effects of CS on DS and GAG on ALK. Surface resonance (SPR) analysis shows that DS has an intentional interaction with the N-terminal domain (NTR), and that its sulfated domain contains CS. Western blotting method for DS disaccharide (dp2) removal, DS tetrasaccharide (dp4) removal, DS acidification, ALK dose-dependent induction, ALK activation dp4:1:2:1 The importance of ALK NTR in the development of HEK293T cells After the dissolution, the cell lysate is mixed with DS and the mixture is mixed with DS. ALKΔNTR DS The difference between DS and NTR is confirmed. DS dp16 at 2.5μM is activated by natural DS, full-length ALK and induced by ALKΔNTR. DS is new to ALK. DS has direct interaction with NTR and DS tetrasaccharide has been shown to induce the activation of ALK.