伸長精子細胞-Sertoli細胞間接着因子に着目した精巣内精子同定法の開発

以细长精子细胞为重点的睾丸内精子识别方法的建立-支持细胞间粘附因子

• 批准号: 21K09375
• 负责人: 阪野 里花
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09375/
• 关键词: apical ES; F-actin; 多光子顕微鏡; micro-TESE; 非閉塞性無精子症; 伸長精子細胞; Sertoli細胞; 精巣毒性; Micro-TESE; 蛍光顕微鏡

非閉塞性無精子症（NOA）の標準治療である顕微鏡下精巣内精子採取術（micro-TESE）では、精子を含む可能性が高い太く蛇行した精細管を採取する。しかしNOAにおけるmicro-TESEの精子採取率は25-60%と低く、報告によって差がある。その原因として、採取する精細管の選択基準が精細管の外観に基づいた術者の主観によることが挙げられる。そこで本研究では、精子を含む精細管を客観的に選択できる方法を開発することを目的とした。私たちは、伸長精子細胞-Sertoli細胞間にのみ存在するapical ectoplasmic specialization（apical ES）と言われる接着因子に着目した。apical ESが存在する精細管は、精上皮において最も成熟した精細胞である伸長精子細胞を含むと考えた。apical ESはF-actinと数十種類のタンパクが連結した接着複合体である。本研究ではapical ESを構成するタンパクを蛍光標識し、精子を含む精細管を同定することを試みた。SPY555-Actinを精巣間質に注射することで、10週齢ラット精細管のF-actinを蛍光標識し、ex vivoで精細管を多光子顕微鏡を用いて観察した。その結果、蛍光標識剤を注射した精巣では、伸長精子細胞に一致するapical ESのF-actinが観察できた。また、精細管におけるF-actinの局在を見ることで精上皮ステージを識別できた。さらに蛍光標識剤の精巣毒性を評価するため、正常精巣と蛍光標識剤を注射した精巣をTUNEL染色し、比較した。その結果、正常精巣と蛍光標識剤を注射した精巣において、精細管内のTUNEL陽性細胞数に有意差はなかった。今後はヒトapical ESの蛋白の同定を行なって、蛍光標識のターゲットを検討し、毒性のない蛍光標識法を開発していく必要がある。

The standard treatment for non-infertile azoospermia (NOA) is micro-sperm aspiration (micro-TESE). NOA micro-TESE sperm collection rate is 25-60%. The reason for this is that the selection criteria for fine tubes are the basis for the selection of fine tubes. This study aims to develop a method for the selection of sperm containing fine tubes. The existence of apical ectoplasmic specialization (apical ES) in sperm cells and elongated sperm cells Apical ES is the most mature sperm cell in the seminiferous epithelium. Apical ES F-actin tens of species of F-actin In this study, the composition of apical ES was studied. SPY555-Actin is injected into the stroma of the fine tube and observed with a 10-week F-actin in the fine tube. The results of this study indicate that F-actin in apical sperm cells can be detected by injection and elongation. F-actin is the most important factor in the development of sperm cells. In addition, the toxicity of sperm was evaluated by TUNEL staining and compared with normal sperm. The results showed that the number of TUNEL positive cells in sperm tubules was significantly different from that in normal sperm. In the future, the identification of apical ES protein, the identification of toxicity, and the development of light identification methods are necessary.