HPV維持複製におけるE4の機能解析：癌化メカニズムの解明と臨床応用を目指して

E4在HPV维持复制中的功能分析：旨在阐明癌变机制及临床应用

• 批准号: 21K09454
• 负责人: 村上 功
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09454/
• 关键词: ヒトパピローマウイルス; E4; 維持複製; raft culture; 子宮頸部発癌機構

申請者がケンブリッジ大学で修得した培養方法で野生型もしくはE4欠損型HPV11、HPV16、HPV18 を角化細胞の中で最も生体内での生活環を模倣しているnormal immortal ker atinocytes (NIKS) に導入した。以前の研究で野生型ではHPV11、HPV16、HPV18が恒常的にHPVが発現しているNIKSの作製に成功していたが、E4 欠 損型においてもHPV11、HPV16、HPV18が遺伝子導入されたNIKSの作成に成功した。しかし継代と共にHPVゲノムが減少するため、常に継代初期の細胞がその後の実 験に必要となることが明らかになった。各HPVを導入したNIKSを用いてraft cultureの作成を行った。野生型HPV16、HPV18のraft cultureの作成は可能であったが、野生型HPV11とE4 欠損型HPV11、HPV16、HPV18に関してはraft cultureの作成ができなかった。technical な問題はないと考えられるため、低リスク型HPVとE4 欠損型HPVのraft cultureは作成が困難であることが予想される。CINの臨床検体、特にCIN2の予後予測因子を明らかにする事を目的に、CIN2の検体の収集と患者情報の整理を行った。またこれらの臨床検体を用いて、免疫染色の条件設定を行った。

将野生型HPV11，HPV16和HPV18引入正常不朽的Ker atinocytes（NIKS），即模仿体内生命周期的角质形成细胞，使用申请人在剑桥大学获得的培养方法。在先前的研究中，HPV11，HPV16和HPV18是在野生型中成功生产的，其中HPV在HPV中不断表达，但是以E4缺陷形式表达，我们已经成功地用HPV11，HPV16和HPV16和HPV18的NIK生产了NIK。然而，随着HPV基因组随通道的减少，据揭示，随后的实验总是需要早期通道细胞。使用NIKS创建了Raft Culture，该NIKS安装了每个HPV。可以为野生型HPV16和HPV18创建木筏培养物，但是不可能为野生型HPV11和E4缺陷HPV11，HPV16和HPV18创建筏培养物。由于没有技术问题，因此很难创建低风险HPV和E4缺陷HPV的筏培养物。我们收集了CIN2标本并组织了患者信息，目的是阐明CIN临床标本的预后预测因子，尤其是CIN2。此外，这些临床标本用于设定免疫染色的条件。

项目成果

The HPV E4 is a candidate biomarker in cervical intraepithelial neoplasia grade 2

HPV E4 是 2 级宫颈上皮内瘤变的候选生物标志物

• 发表时间: 2021
• 作者: Murakami I;Takahashi R;Kugimiya T;Tanaka K.
• 通讯作者: Tanaka K.