統合解析を用いた網膜神経節細胞別の脆弱性に関わる緑内障障害シグナル伝達経路の探索

利用整合分析探索与个体视网膜神经节细胞脆弱性相关的青光眼损伤信号转导途径

• 批准号: 21K09690
• 负责人: 面高 宗子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09690/
• 关键词: 緑内障; 網膜神経節細胞; 統合解析; 脆弱性; 動物モデル

緑内障は成人途失明原因第一位の眼疾患で、本邦は世界に類を見ないスピードで高齢化が進んでおり、今後も緑内障による失明患者数の増加が確実視されている。緑内障の本態は網膜神経節細胞（RGC）の細胞死であるが、現行の治療は眼圧を下降させる治療のみでありアンメットメディカルニーズが存在する。RGC死の詳細なメカニズムを明らかにして、治療薬の開発に繋げていく必要がある。これまでも、げっ歯類を用いた創薬研究は90％以上開発段階で中止となっており、ヒト緑内障の病態を意識した開発が不可欠となる。緑内障では太い軸索を有する大きなRGCが早期から障害され、小さなRGCはミトコンドリア障害に脆弱であることが知られている。本研究では多因子疾患である緑内障のシンプルな障害モデルを作成し、基礎研究技術の進歩を駆使し、緑内障動物モデルにより、げっ歯類RGCをセルソータでサイズ別に分取し、網羅的遺伝子発現解析とメタボローム解析の統合解析から、大小RGCの細胞死シグナルメカニズムを探索する。「動物モデルから統合解析によるプロファイルデータ取得にむけて」マウス障害モデルについて、軸索挫滅・眼圧上昇・酸化ストレス障害モデルに対し、上丘からフルオロゴールド逆行性染色、およびフラットマウントRBPMS抗体免疫染色法により、障害モデルにおける継時的な細胞数の評価を行い、障害モデルの作成を行った。それぞれの障害モデルにおいて、細胞数の変化を調べ、サンプル回収に適した時期の同定を行った。続いて、マウス網膜から神経細胞を単離し、網膜神経節細胞をラベルし、セルソータによるRGCの細胞サイズによるカウントを行った。障害後の複数のタイムポイントで、生存するRGCをサイズ別に検討し、障害の種類により、RGCの大小で脆弱性が異なることを検討した。さらに、細胞の大小における主要な細胞死シグナル伝達経路を検討した。

Cataract is the leading cause of blindness in adults, and the number of cataract blindness patients in the world is increasing. The natural state of cataract is the cell death of retinal ganglion cells (RGC). The current treatment reduces the eye pressure. RGC is designed to provide a detailed description of the treatment and development of the drug. More than 90% of the research on cataract development in China is incomplete. The cataract axis has a large number of RGC early damage, small number of RGC early damage, and small number of RGC early damage. This study aims to explore the development of multifactorial disorders, advances in basic research techniques, cataract animal models, differential extraction of dental RGC, integrated analysis of gene discovery, and cellular analysis of large and small RGC. "The acquisition of tumor cells during the integrated analysis of animal tumors is difficult." The evaluation of the number of tumor cells when the tumor is damaged, axonal collapse, increased eye pressure, and acidification of the tumor are performed. Retrograde staining of the superior colliculus tumor cells, and immunostaining with the RBT antibody RBPMS method are performed. The number of tumor cells when the tumor is damaged is evaluated and the tumor cells are prepared. The number of cells in a cell is adjusted, and the number of cells in a cell is adjusted. In addition, the cells of retinal ganglion are isolated from each other, and the cells of retinal ganglion are isolated from each other. The number of defects after damage, the survival of RGC, the type of damage, the size of RGC, and the vulnerability are discussed. In addition, the size of the cell is mainly related to the cell death.