眼圧日内変動に対するメラトニン系の役割の解明

阐明褪黑激素系统对眼压昼夜波动的作用

• 批准号: 21K09739
• 负责人: 東出 朋巳
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09739/
• 关键词: メラトニン; Aanat; Hiomt; マウス; 網膜; 松果体; 眼圧; 日内変動; 遺伝子多型; 時計遺伝子

1) メラトニン産生マウスの作成：B6J.MSM-Aanat<MSM>とB6J.MSM-Hiomt<MSM>を交配させ、F1 （Aanat(+/-);Hiomt(+/-)）を42匹作成した。F1同士の交配により得られたF2の88匹のうちAanat(+/+);Hiomt(+/+)1匹、Aanat(-/-);Hiomt(-/-)3匹が得られた。F2同士の交配により得られたF3の99匹のうちAanat(+/+);Hiomt(+/+)14匹、Aanat(-/-);Hiomt(-/-)9匹がえられた。2) 眼球と松果体の組織切片の作成：F1 Aanat(+/-);Hiomt(+/-)の眼球の凍結切片、松果体のパラフィン切片を作成し、ＨＥ染色にて組織構造を確認できた。3) マウス用OCTによる眼底写真撮影と網膜厚測定：マウス用OCT（MicronⅣ、Phoenix社）を用いてF1（Aanat(+/-);Hiomt(+/-)）において眼底写真撮影と網膜厚測定を行うことができた。4) ANATとHIOMTの発現の確認：B6J.MSM-Aanat<MSM>とB6J.MSM-Hiomt<MSM>の網膜と松果体におけるAANATとHIOMTの発現をWesternBlottingにて確認した。5)メラトニンの定量：網膜、松果体、血液中のメラトニンを定量するために、LC-MS/MSによる測定法の確立を試みた（金沢大学疾患モデル総合研究センター　研究基盤支援施設　西内巧准教授と共同研究）。メラトニン試薬を用いて10ppb-10ppt付近の標準品の分析データを作成することができた。

1)B6J.MSM-Aanat. B6 J. <MSM>MSM-Hiomt<MSM>. F1 (Aanat(+/-);Hiomt(+/-)). F2 has 88 pairs of Aanat(+/+);Hiomt(+/+)1 pair, Aanat(-/-);Hiomt(-/-)3 pairs of Aanat(+/+). F2 co-worker mating 2)Preparation of histological sections of the pineal gland and eyeball: F1 Aanat(+/-);Hiomt(+/-) frozen sections of the eyeball and pineal gland; preparation of histological sections of the pineal gland; HE staining; and confirmation of histological structure. 3)OCT (Micron IV, Phoenix) is used to measure retinal thickness. 4)Confirmation of the occurrence of ANAT and HIOMT: B6J. <MSM>MSM-Aanat and B6J.MSM-Hiomt and the retina <MSM>and pineal gland. 5) Quantification of serum concentration: Quantification of serum concentration in retina, pineal gland, and blood, and establishment of LC-MS/MS assay (Joint research by Professor Takeshi Nishiuchi, Research Base Support Facility, Kanazawa University). 10ppb-10ppt for the preparation of analytical solutions for the nearest standard