眼圧日内変動に対するメラトニン系の役割の解明

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1) メラトニン産生マウスの作成：B6J.MSM-Aanat<MSM>とB6J.MSM-Hiomt<MSM>を交配させ、F1 （Aanat(+/-);Hiomt(+/-)）を42匹作成した。F1同士の交配により得られたF2の88匹のうちAanat(+/+);Hiomt(+/+)1匹、Aanat(-/-);Hiomt(-/-)3匹が得られた。F2同士の交配により得られたF3の99匹のうちAanat(+/+);Hiomt(+/+)14匹、Aanat(-/-);Hiomt(-/-)9匹がえられた。2) 眼球と松果体の組織切片の作成：F1 Aanat(+/-);Hiomt(+/-)の眼球の凍結切片、松果体のパラフィン切片を作成し、ＨＥ染色にて組織構造を確認できた。3) マウス用OCTによる眼底写真撮影と網膜厚測定：マウス用OCT（MicronⅣ、Phoenix社）を用いてF1（Aanat(+/-);Hiomt(+/-)）において眼底写真撮影と網膜厚測定を行うことができた。4) ANATとHIOMTの発現の確認：B6J.MSM-Aanat<MSM>とB6J.MSM-Hiomt<MSM>の網膜と松果体におけるAANATとHIOMTの発現をWesternBlottingにて確認した。5)メラトニンの定量：網膜、松果体、血液中のメラトニンを定量するために、LC-MS/MSによる測定法の確立を試みた（金沢大学疾患モデル総合研究センター　研究基盤支援施設　西内巧准教授と共同研究）。メラトニン試薬を用いて10ppb-10ppt付近の標準品の分析データを作成することができた。