メラトニンの網膜における神経保護作用の検討

褪黑激素对视网膜神经保护作用的检查

• 批准号: 10770923
• 负责人: 東出 朋巳
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770923/
• 关键词: メラトニン; ラット; 網膜; 神経保護

1.ラット網膜内メラトニン含量の測定ラット網膜のメラトニン含量をHPLCおよび電気化学検出器(東ソー,EC-8020)を用いて測定した。Eicompak MA-5ODSカラムを使用して25%メタノール,25℃の条件で標準物質を流し,100pgまでメラトニンを検出することができた。ブラウンノルウエーラットを用いて網膜内メラトニン含量が最大となる暗期間の中間時点(午前2時)において暗赤色光下で網膜を摘出しメラトニン含量の測定を行ったが,検出限界以下であった。5mg/kgのメラトニンの腹腔内投与20分後の網膜内メラトニン含量は約15ng/mg proteinであった。2.メラトニン合成酵素(serotonin-N-acetyltransferase,NAT)のmRNA量の測定ラットのNATcDNA塩基配列から1対のプライマーを設定し(5'-ATCTCAGTCTCGGGTACCTG-3'および3'TGTCACCGACGACTGGGTTC-5'),ラット網膜から抽出したpolyA-RNAを鋳型としてRT-PCRを行った。目的の462塩基対のDNA断片が増幅され,RT-PCR産物の直接DNAシークエンスを行いNATcDNAに一致することが確認された。3.ラット網膜光障害モデルの作成とメラトニン腹腔内投与の神経保護効果ケタラールおよびセラクタールによる全身麻酔下でラットの片眼に光ファイバーにより30分間光照射(角膜面照度20,000lx以上)を行った。1週間後,眼底中央に円形の網膜変性巣が観察され,網膜電図のa,b波の減弱傾向がみられた。光照射10分前に5mg/kgのメラトニンの腹腔内投与を行った場合,網膜変性は明らかに抑制された。

Within 1. ラ ッ ト omentum メ ラ ト ニ の ン determination ラ ッ ト retinal の メ ラ ト ニ ン content を HPLC お よ び electric chemical 検 気 extractor (east ソ ー, EC - 8020) を with い て determination し た. Eicompak MA - 5 ods カ ラ ム を use し て 25% メ タ ノ ー ル, 25 ℃ の し を で standard material flow conditions, 100 pg ま で メ ラ ト ニ ン を 検 out す る こ と が で き た. ブ ラ ウ ン ノ ル ウ エ ー ラ ッ ト を with い て in retinal メ ラ ト ニ ン content が biggest と な る の during the dark middle point (2) by noon に お い て dark red light で retinal を pick out し メ ラ ト ニ の ン determination を line っ た が, 検 out under limit で あ っ た. 5 mg/kg の メ ラ ト ニ ン の cast with 20 points within の retinal after intraperitoneal メ ラ ト ニ は ン content about 15 ng/mg protein で あ っ た. 2. メ ラ ト ニ ン synthetase (serotonin - N - acetyltransferase, NAT) の の mRNA quantity determination ラ ッ ト の NATcDNA salt base with column か ら 1 の seaborne プ ラ イ マ ー を set し (5 '- ATCTCAGTCTCGGGTACCTG - 3' お よ び 3 'TGTC ACCGACGACTGGGTTC - 5 '), ラ ッ ト retinal か ら spare し た polyA - RNA を type where と し を line っ て RT - PCR た. Purpose の 462 salt base の seaborne DNA fragment が rights of さ れ, rt-pcr product direct DNA の シ ー ク エ ン ス を line い NATcDNA に consistent す る こ と が confirm さ れ た. 3. ラ ッ ト retinal light handicap of モ デ ル の made と メ ラ ト ニ ン cast with intraperitoneal の 経 god protect unseen fruit ケ タ ラ ー ル お よ び セ ラ ク タ ー ル に よ る general ma 酔 で ラ ッ ト の piece eye に light フ ァ イ バ ー に よ り 30 points between light (corneal surface illumination over 20000 lx) line を っ た. One week later, the central に oval <s:1> omentum of the fundus shows a が観 observation され, and there is a tendency for the <s:1> a and b waves of the omentum to weaken がみられた. 10 minutes before light irradiation, に5mg/kg <s:1> メラトニ <s:1> <s:1> is intraperitoneally administered to を in った motion, and the omentum changes に brightness ら に に inhibition された.