癌関連線維芽細胞が活性化するシグナルに着目した新たな口腔癌分子治療法の構築

构建一种新的口腔癌分子治疗方法，重点关注激活癌症相关成纤维细胞的信号

• 批准号: 21K09854
• 负责人: 栢森 高
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09854/
• 关键词: 癌関連線維芽細胞; 口腔扁平上皮癌; WNTリガンド; プロテオーム解析

７つのヒト口腔癌細胞株とヒト皮膚線維芽細胞(NHDF)をtranswellを介して共培養した結果、NHDFと共培養した口腔癌細胞株４つにおいて、WNT7Aの発現が有意に上昇するのが認められた（特に発現上昇はHO-1-N-1およびHSC-5で強く認められた）。siRNAを用いて癌細胞のWNT7A発現をノックダウンした結果、NHDF共培養により促進されるHO-1-N-1、HSC-5の運動能力および浸潤能力は有意に抑制された。また、ヒト口腔扁平上皮癌手術材料122例を用いた免疫組織化学的検討では、癌細胞におけるWNT7A発現と浸潤深さとの間に有意な相関が認められた。また、癌細胞におけるWNT7A発現の強さと癌胞巣周囲に誘導されるalpha-SMA陽性の癌関連線維芽細胞(以下、CAF)との間にも正の相関が認められた。次にWNT7Aによる口腔癌制御機構に関わる因子を探索するためにマイクロアレイにてNHDFと共培養したHSC-5で発現が変動している遺伝子を抽出した。そして抽出した遺伝子を、過去の研究論文(Cell, 2017, 171(7):1611-1624)で頭頸部扁平上皮癌のシングルセルRNAシーケンスにて解析・報告されたpartial-EMTおよび上皮分化に関連した遺伝子群と照らし合わせた結果、いくつかの候補因子が得られた。その中でもCLDN1の発現がリコンビナントヒトWNT7A添加によって有意に抑制されることを見出した。更に、siRNAによりHO-1-N-1とHSC-5のCLDN1発現を抑制すると、癌細胞の運動能力が有意に促進されること、WNT7AによるCLDN1発現抑制はAKTのリン酸化を介していることもウェスタンブロットによって示された。

7. Oral cancer cell lines and NHDF cells were co-cultured with transwell medium, and the expression of WNT7A increased intentionally (especially HO-1-N-1 and HSC-5). siRNA was used to stimulate the expression of WNT7A in cancer cells, and NHDF co-culture promoted the motility and infiltration of HO-1-N-1 and HSC-5, but intentionally inhibited them. 122 cases of oral squamous cell carcinoma were examined by immunohistochemistry. WNT7A expression in cancer cells is strongly correlated with the induction of alpha-SMA-positive cancer-associated vascular cells (CAF) and the indirect correlation between WNT7A and CAF. Next, WNT7A was used to explore factors related to oral cancer control mechanism, and NHDF co-culture was used to extract genes. A previous research paper (Cell, 2017, 171(7):1611-1624) analyzed the relationship between partial EMT and epithelial differentiation and candidate factors. CLDN1 is now appearing in the middle of the game, and WNT7A is being added to the game. In addition, siRNAs inhibit HO-1-N-1 and CLDN1 expression in HSC-5, and the motility of cancer cells is intentionally enhanced. WNT7A inhibits CLDN1 expression, and AKT phosphorylation is mediated by siRNA.