In vitro study on effects of antimicrobial photodynamic therapy against bacterial pathogenicity

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半導体レーザーや発光ダイオード（LED）に光感受性色素を組合せた抗菌的光線力学治療（a-PDT）が，従来の機械的除菌治療を補完しうる新たな術式として発展が期待されているが，これまで報告された研究の多くが殺菌効果を検証したものであり，死には至らないものの病原性の変化に着目し評価した報告はほとんどない。そこで本研究は，光線力学療法による静菌・殺菌効果にとどまらず，微生物の病原性変動に焦点をあて，a-PDTやレーザー単体での照射（PDT）による遺伝子発現変化，形態学的変化，および生化学的変化を総合的に検証し，将来的に歯科臨床の場での新たな光線力学療法の応用の拡大の可能性を探っている。本年度は特に，歯周病やインプラント周囲炎，誤嚥性肺炎の関連菌の一つとして挙げらている真菌に属す常在菌Candida albicansに着目し，光線力学療法による影響を調査する実験系を整えた。検討内容は，①Candida albicansの増殖時の形態変化の観察; Candida albicansを生食でOD1.0（λ＝660;）に調整し100倍希釈液をRPMI溶液で培養し，２時間おきに光学顕微鏡にて観察した。②Candida albicansの増殖曲線作成；Candida albicansを生食でOD1.00に調整しRPMI液体培地とサブロー液体培地それぞれ100mlに100倍希釈をし，30℃と37℃にて培養を行い，1時間おきに濁度を計測した。③Candida albicansのRNA抽出；Candida albicansを生食でOD1.0に調整し100倍希釈液をRPMI溶液で培養し，その後②の実験結果で得た定常期に達した濁度の溶液を2ml、25mlと採取してFastPrepを用いてRNA抽出方を行った。使用するMatrixB,C,KでRNAの収量を比較検討した。