Facilitation of wound healing by proanthocyanidin: Application in gerodontology

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初年度は、0.5 gm/mLで調製したプロアントシアニジン水溶液による60秒間処理のin vitro創傷治癒促進効果の優位性を実証することができなかった。そこで、今年度は、濃度と処理時間を変えて同様の実験を行った。プロアントシアニジンの濃度を0.25, 0.5, 1.0, 2.0 mg/mLとし、処理時間を60秒間、120秒間、180秒間とした。プロアントシアニジン（Leucoselect, Indena）を生理食塩水に0.5 mg/mLとなるように溶解し、0.2 umのフィルターで除菌後、細胞試験に用いた。CytoSelect Wound Healing Assay kit（Cell Biolabs）を用いて、24-wellセルカルチャープレートにモノレイヤー創傷モデル（0.9 mm幅の一定のギャップ）を作製した。ハムスター肺由来線維芽細胞（V79）およびマウス線維芽細胞（3T3-L1）を用いて創傷モデルをプロアントシアニジン溶液で処理後、新しい培地をウェルに入れて培養を行った。処理後24時間で位相差顕微鏡を用いて創傷部位（ギャップ）の閉鎖を観察してImage Jを用いた画像解析を行い、創傷部位の閉鎖率を決定した。その結果、プロアントシアニジン処理によるいずれの細胞の創傷モデルにおいても創閉鎖率に有意な差は認められなかった。そこで、プロアントシアニジンに加えて他のポリフェノール水溶液（生理食塩水に溶解）を用いた実験を追加で実施した。実験には、水溶性ポリフェノールである没食子酸、カフェイン酸、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレートを用いた。0.5 mg/mLのカフェイン酸による60秒間処理で創閉鎖率がコントロール（生理食塩水処理）よりも高くなる傾向が認められた。今後、再現性を確認しin vivo創傷モデルで用いるポリフェノールの選択と処理条件の最適化を実施する。