The functional role of macrophage on the vascular permeability

巨噬细胞对血管通透性的功能作用

• 批准号: 21K10122
• 负责人: 飯島 毅彦
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K10122/
• 关键词: アルシアンブルー; 走査型電子顕微鏡; 透過型電子顕微鏡; 敗血症モデル; グリコカリックス; 肺血管; マクロファージ; 誤嚥性肺炎; LPS; FACS解析; 好中球; 免疫化学染色; 血管透過性; 血管内皮障害

血管内皮機能を制御・保護すると言われているグリコカリックス(GCX)の形態把握には,ランタン灌流固定後の電子顕微鏡観察が一般的であるが,ヒトへの応用は困難である.そこで我々が確立したアルシアン青(ALB)浸漬固定によるマウス腎組織のGCX観察法を応用し,灌流固定が困難な肺を浸漬脱気固定してGCX観察する方法を確立し,ヒト肺への応用を目指している.10週齢 雄 BALB/Cマウス肺を摘出・細切後, ALB固定液で浸漬固定・脱気した試料を走査電子顕微鏡(SEM)と透過電子顕微鏡(TEM)で観察した.確立した方法を用いて,LPSを腹腔内投与した敗血症マウスの肺GCXをSEM/TEM下で健常マウスの形態と比較検討した.定法で観察した肺GCXと同様に,本法でも血管内腔にGCXが薄く全周性に存在していた.脱気前後の肺内部の微細構造を比較検討でも,脱気操作による肺組織への影響は認められなかった.更に臨床応用のため,6日間必要であった試料作製から観察までの期間を2日間に短縮した.作製した敗血症マウスではLPS投与後12時間で,GCX脱落マーカーであるシンデカン-1が最も高値となり,GCXは肺血管内で球状に凝集し,散在している様子が観察された.本法を用いることで,浸漬固定した肺組織のGCXが2日間で観察可能となり,ヒト肺検体への応用が期待される.また健常マウスと敗血症マウスで肺GCXの状態に明瞭な差が認められた.今後,本方法が敗血症などの病態解明の研究推進の一助になることを期待している.

为了了解糖脂（GCX）的形态（据说可以控制和保护血管内皮功能），灯笼灌注固定后的电子显微镜很常见，但很难应用于人类。我们通过浸入Alcian Blue（ALB）的浸入固定小鼠肾脏组织的GCX观察方法，并通过浸入肺部固定来观察GCX的方法，难以灌注，并旨在将其应用于人类肺部。去除和切割肺并切割肺部后，使用扫描电子显微镜（SEM）和透射电子显微镜（TEM）观察到浸入并固定并与Alb固定剂脱气的样品。使用已建立的方法，将腹膜内LPS施用LPS的肺GCX与SEM/TEM下的健康小鼠的形态进行了比较。与使用标准方法观察到的肺GCX相似，GCX在血管腔中呈较薄且圆周存在。即使比较脱气前后的肺内部的微观结构，由于脱气而没有观察到对肺组织的影响。此外，对于临床应用，需要样本制备6天。将考试减少到两天的时间。在产生的化粪池中，Syndecan-1是GCX辍学标记，是LPS施用后12小时的最高，并且观察到GCX在肺部血管中的肺部血管中聚集并散射。使用这种方法，可以在两天内观察到浸入后的固定肺组织中的GCX，预计将应用于人肺样本。此外，健康小鼠和化粪池小鼠之间观察到肺GCX状态的明显差异。我们希望这种方法将有助于促进研究，以阐明败血症和其他病理的病理。

项目成果

循環障害治療戦略のための肺グリコカリックス観察法の確立

肺糖萼观察方法的建立及循环障碍治疗策略

• 发表时间: 2021
• 作者: 若月萌音;髙木孝士;牛山明;南雲佑;井上由理子;本田一穂;飯島毅彦
• 通讯作者: 飯島毅彦

HOMA(ヒト口腔細菌定着)マウスモデルを用いた口腔常在菌による肺炎増悪誘導の解析

使用 HOMA（人类口腔细菌定植）小鼠模型分析口腔常驻细菌诱导肺炎恶化的情况

• 发表时间: 2022
• 作者: 林真奈美;逸見百江;森美菜;深町はるか;桑田啓貴
• 通讯作者: 桑田啓貴

アルシアンブルー浸漬迅速固定法の応用 敗血症モデルマウスのGCX観察(Ver.2)

阿尔新蓝浸泡快速固定法的应用：脓毒症模型小鼠GCX观察（Ver.2）

• 发表时间: 2022
• 作者: 若月萌音;髙木孝士;牛山明;南雲佑;井上由理子;本田一穂;飯島毅彦
• 通讯作者: 飯島毅彦