超遠心法による分画抽出血清のプロテオーム解析を利用した新規硬組織形成誘導法の開発

利用超速离心提取的分级血清的蛋白质组分析开发新的硬组织形成诱导方法

• 批准号: 21K10162
• 负责人: 上田 公子
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K10162/
• 关键词: 硬組織形成; ウシ胎児血清; 超遠心; 歯原性間葉細胞; 細胞分化

令和４年度は、初年度のプロテオーム解析の結果から、Fam3CとMyocilinに注目し、分化誘導した硬組織形成細胞に発現があるかどうかを確認することから研究を開始した。ウシ胎児血清(Fetal Bovine Serum : 以下FBS)は，超遠心分離機にて100,000g×18時間超遠心し，3層に分かれた分画をそれぞれ回収し，最上方を第1層，中間層を第2層，最下層を第3層として使用した。初年度の研究で、歯原性間葉細胞(mDP)の分化について検討したところ、通常のFBS5%に第1層を5%添加し10%FBSとした培地の使用で、通常より早く石灰化が開始する傾向を確認できたため、今年度の研究では、通常のFBS10%使用をコントロール、通常のFBS5%、通常のFBS5%に各分画5%を加えた10%FBSの5群について、硬組織形成細胞のうち、歯原性間葉細胞(mDP)を用いて、分化誘導培地にて分化誘導し、mRNAを回収して、Fam3CとMyocilin、初期の分化を示す分子であるPanx3、分化を示す分子であるDsppについて、発現を確認する実験を行った。結果、第1層を5%添加した培地の使用で、早期にFam3Cの発現を認め、続いて、Panx3、Dsppと順に発現することが確認できた。Myocilinの発現はFam3Cより遅く、発現量もわずかだった。そこで、Fam3Cの硬組織形成細胞への影響を検討するため、Fam3Cのタンパクを用いて、Fam3Cの添加濃度や培養期間による、硬組織形成細胞への影響の検討を開始したが、まだ安定した結果は得られていない。歯原性上皮細胞についても、増殖と分化に関与する因子について研究を進めている。今後，Fam3Cの硬組織形成細胞への影響を検討するとともに、そのメカニズムの解明を行い、象牙質再生または骨再生の新規治療方法の開発に繋がる研究を目指し、実践したい。

在2022年，我们根据第一年的蛋白质组分析的结果专注于FAM3C和肌动蛋白开始研究，并检查在分化中诱导的硬组织形成细胞中是否存在表达。将胎牛血清（FBS）在超级离心分离中进行超速离心100,000 g x 18小时，并收集了三层级分，并将顶层用作第一层，中间层用作第二层，底层被用作第三层。在第一年的研究中，我们研究了源源不断的间充质细胞（MDP）的分化，发现钙化的趋势比使用5％正常FBS和10％FBS使用5％正常FBS和5％正常FBS的培养基和10％FBS的培养基和10％FBS的培养基相同的培养基和正常FBS中的5％的培养基分配的培养基的培养基差异，而在正常FBS中使用的培养基，并将其划分为5％，并且是在正常FBS中分配的，这些型号与正常FBS相差不同。收集以确认FAM3C和肌动蛋白的表达，PANX3是一种表现出早期分化的分子，而DSPP是一种表现出分化的分子。结果，可以证实使用含有第一层的5％的培养基，然后是PANX3和DSPP时，早期观察到FAM3C表达。肌动蛋白的表达比FAM3C慢，也略微表达。因此，为了研究FAM3C对硬组织形成细胞的影响，我们开始使用FAM3C蛋白来研究FAM3C增加浓度和培养持续时间对硬组织形成细胞的影响，但尚未获得稳定的结果。我们还在研究涉及牙源性上皮细胞增殖和分化的因素。将来，我们将研究FAM3C对硬组织形成细胞的影响，澄清其机制，并旨在实施研究，从而导致开发用于牙本质再生或骨骼再生的新治疗方法。