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オートファジー必須因子Atg8変異体を用いたオートファゴソーム形成系の開発

使用 Atg8 突变体（一种重要的自噬因子）开发自噬体形成系统

基本信息

批准号：
20K06637
负责人：
山崎章徳
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、Atg8とオートファゴソーム形成因子との結合がオートファゴソーム形成に及ぼす影響を理解し、Atg8結合蛋白質と結合できないAtg8変異体を用いたオートファゴソーム形成系の開発を試みる。このオートファゴソームを単離し内容物を解析することで、受容体を介さないカーゴの取り込みがAtg8に依存しているのかどうか、あるいは他のオートファゴソームへの取り込みを規定する因子の同定を目指している。前年度に引き続き、Atg8変異体としてF104A変異体とF104A/Y106A変異体を用いて解析を行った。液胞リパーゼであるAtg15の欠損をこれら細胞に加えることで、オートファゴソームと液胞の融合後に、液胞内に形成されるオートファジックボディが分解を免れて蓄積するかを観察した。すると、野生型細胞と同様にAtg8変異体でも融合したオートファゴソームの蓄積が観察され、液胞の精製も可能であることが明らかとなった。そこでこのAtg15欠損細胞を用いてオートファジックボディが蓄積した液胞を精製し、液胞内容物を質量分析法により解析することにより、Atg8の野生型および変異体がそれぞれ形成するオートファゴソーム特異的なカーゴの同定に成功した。今後はこれらカーゴについて解析することで、バルクオートファジー特異的なカーゴと選択的オートファジー特異的なカーゴの分類が可能となり、オートファゴソームへのカーゴの取り込みにおけるAtg8の寄与についての知見が深まることが期待される。

In this study, we tried to understand Atg8 binding protein and its effect on protein formation and development of protein formation system by combining Atg8 binding protein and Atg8 binding protein. The content analysis of the content of the content of the content The previous year, Atg8, F104A, F104A, Y106A, F106A, F104A, F1 The cells are divided into two groups: the first group is composed of cells, the second group is composed of cells, and the third group is composed of cells. The wild type cells and the homologous Atg8 are fused together, and the accumulation and purification of the cells are possible. Atg15 cells were successfully identified by mass spectrometry for cell purification, cell content analysis, and wild-type and mutant formation of Atg8 cells. In the future, we will analyze the contents of this report, and we will look forward to seeing the contents of this report.

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Development of new tools to study lipidated mammalian ATG8

开发研究脂化哺乳动物 ATG8 的新工具

DOI：
10.21203/rs.3.rs-221701/v1
发表时间：
2021
期刊：
Research Square (preprint)
影响因子：
0
作者：
Park Sang-Won;Jeon Pureum;Yamasaki Akinori;Lee Hye Eun;Mun Ji Young;Jun Yong-Woo;Park Ju-Hui;Lee Seung-Hwan;Lee Soo-Kyeong;Song Hyun Kyu;Lee You-Kyung;Lazarou Michael;Cho Dong-Hyung;Komatsu Masaaki;Noda Nobuo;Jang Deok-Jin;Lee Jin-A
通讯作者：
Lee Jin-A

Super-assembly of ER-phagy receptor Atg40 induces local ER remodeling at contacts with forming autophagosomal membranes