Elucidation of the regulatory mechanism of integrin-harboring vesicles for the suppression of pathogenic vesicles
阐明携带整合素的囊泡抑制致病性囊泡的调节机制
基本信息
- 批准号:20K07331
- 负责人:
- 金额:$ 2.83万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 财政年份:2020
- 资助国家:日本
- 起止时间:2020-04-01 至 2024-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本研究課題では, リンパ球の活性化やホーミングの過程において細胞間接着を介して重要な働きを担う接着分子である白血球インテグリンLFA-1を含む小胞の生成・輸送過程に注目し,その制御機構の解明を目指して実験を進めている。本年度は、前年度までに確立したスピニングディスク型超解像共焦点顕微鏡Dragonflyを用いたイメージング手法を用いて、様々な因子との共局在を超解像レベルで解析し、LFA-1の輸送に関わる因子をいくつか同定した。前年度までの解析からLFA-1のリガンドであるICAM-1の結合依存的に誘導されるシグナル (outside-in シグナル)依存的にLFA-1細胞内小胞が顕著に形成されることをLFA-1に融合させたSNAPtagを生きた細胞内で共有結合により蛍光標識して可視化することにより明らかにしていた。リンパ球にoutside-inシグナルをICAM-1やLFA-1の活性型構造を特異的に認識するモノクローナル抗体を用いて導入した後にパラホルムアルデヒドで固定しLFA-1含有小胞に局在する分子を蛍光免疫染色により調べたところ、この小胞にはRab7やRab8が特異的に共局在した。CRISPR-Cas9法を用いてRab7やRab8が欠損したリンパ球を作製し、その細胞接着能を調べたところ、接着能は野生型と比べて有意に低下した。さらに、細胞接着面におけるLFA-1の集積度合をLFA-1の機能に影響を与えない抗LFA-1抗体を用いて評価したところ、Rab7やRab8欠損リンパ球では集積が顕著に低下していることが明らかになった。以上の結果からRab7やRab8はoutside-in刺激依存的にLFA-1の接着面への輸送を制御する新規の因子であることが示唆された。
The purpose of this study is to activate the process monitoring system, and then to introduce the important factors in the cell, and then to make a molecular analysis of the white blood cell lysate LFA-1 to generate a process monitoring device, and the monitoring machine understands that the monitoring system is intended to improve the performance of the system. In the current year and the previous year, we are sure to make sure that the common focus of the super-resolution type super-resolution is "micro-image", "" In the previous year, we analyzed the LFA-1 information system (ICAM-1) in conjunction with the dependent LFA-1 cytoskeleton (LFA-1), which is dependent on the LFA-1 (LFA-1). To form a common combination of optical tags in the cells of the LFA-1, which is dependent on the integration of the LFA-1, the fusion of the SNAPtag cells, the optical tags can be combined with each other, and the optical tags can be realized. The outside-in, ICAM-1, LFA-1, active antibodies, antibodies, In the CRISPR-Cas9 method, the Rab7 Rab8 is used as a tool, and then the wild type is lower than the wild type. The combination of LFA-1 and anti-LFA-1 antibodies was detected by the combination of anti-LFA-1 antibodies and anti-LFA-1 antibodies, and the results showed that the concentration of anti-LFA-1 antibodies was higher than that of Rab7 antibodies. As a result of the above results, the LFA-1 that Rab7 Rab8 stimuli depend on will then be sent to control new regulation factors.
项目成果
期刊论文数量(20)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Single-molecule dissection of leukocyte integrin LFA1 activation mechanism
白细胞整合素LFA1激活机制的单分子解析
- DOI:
- 发表时间:2023
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Kondo;N.;Ueda;Y.;and Kinashi;T.
- 通讯作者:T.
インテグリン活性化因子の局所的運動特性の違いによる免疫細胞移動メカニズムの解明
基于整合素激活剂局部运动特征差异阐明免疫细胞迁移机制
- DOI:
- 发表时间:2021
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:近藤直幸;植田祥啓;南暁彦;真上薫;木梨達雄
- 通讯作者:木梨達雄
Rap1/Talin-1/Kindlin-3を内包する新規ポジティブフィードバック回路によるインテグリン活性化の離散的制御
通过包含 Rap1/Talin-1/Kindlin-3 的新型正反馈电路离散控制整合素激活
- DOI:
- 发表时间:2020
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:近藤直幸;植田祥啓;木梨達雄
- 通讯作者:木梨達雄
構造解析コンソーシアムの発展と活用による分子に基づいた分野横断型橋渡し研究への展開
开发和利用结构分析联盟开展基于分子的跨学科转化研究
- DOI:
- 发表时间:2021
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:近藤直幸,片野泰代;赤間智也;池田幸樹;鈴木健介;富山尚;寿野良二;神田晃;八木正夫;岩井大
- 通讯作者:岩井大
Rap1 facilitates T cell polarity via spatial regulation of MLC and ARAP1
Rap1 通过 MLC 和 ARAP1 的空间调节促进 T 细胞极性
- DOI:
- 发表时间:2021
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Y. Ueda;K. Higasa;Y. Kamioka;N. Kondo;T. Kinashi,
- 通讯作者:T. Kinashi,
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- 影响因子:0
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- DOI:
- 发表时间:
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- 影响因子:0
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- 发表时间:
2016 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
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久保倫子・駒木伸比古・田中健作
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