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マラリア原虫を特徴づける生物学的分子基盤の解明とその応用

阐明疟疾寄生虫的生物分子基础及其应用

基本信息

批准号：
20K07463
负责人：
有末伸子
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University (2022)Osaka University (2020-2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

マラリア原虫に特異的であり、進化の過程で遺伝子配列の変化が少なく、既知の機能ドメインをもたないために、その機能が不明であるような分子をマラリア原虫が持つ約5000の遺伝子の中から40あまりをピックアップした。進化の過程で配列の変化が少ない遺伝子はマラリア原虫増殖に必須であると考えられ、マラリア原虫のみが有するということはマラリア原虫を特徴づけるような機能に関与すると考えられることから、その分子基盤を解明することが本研究課題の目的である。今年度は昨年度に引き続きピックアップした分子群の中で赤血球期に発現量が多い分子Xに着目し研究を行った。熱帯熱マラリア原虫Plasmodium falciparumの分子Xはトロフォゾイト期以降に発現するタンパク分子であり、間接蛍光抗体法によりオルガネラ、おそらくはアピコプラストに局在する分子であることが推測されたが、シグナルが不鮮明であったため、より鮮明な画像を得るために分子の末端に蛍光タンパク(mCherry)を融合タンパクとして発現する「分子X-mCherry」をゲノム編集により作出し、蛍光顕微鏡により局在を観察した。赤色の蛍光はトロフォゾイト期からシゾント期の原虫において複数のスポットとして観察することができた。しかしながら明確な局在位置は判断が難しく、免疫電顕により詳細は局在位置を観察することを考えている。分子Xは必須分子でありノックアウトはできないため発現量を増加させた強発現株、発現量を低下させたノックダウン株をゲノム編集で作製中であり、細胞株の完成後は細胞増殖における変化をマラリア原虫のスタンダード株（３D7株）のものと比較する予定である。また、免疫電顕や相互作用している分子を特定するための免疫沈降実験に使用するための分子Ｘ特異的ウサギ抗体の作製も進めている。

The protozoan is unique, the evolution process, the transformation of the gene arrangement is less, the known function is more, the function is unknown, the molecule is more, the protozoan has about 5000 genes, and the number of genes is about 40. The evolution process of the protozoa is characterized by the evolution of the protozoa and the molecular basis of the protozoa. This year, we will conduct research on molecular X in the middle of the molecular population. The molecular X of Plasmodium falciparum was detected by indirect light antibody method. The molecular X of Plasmodium falciparum was detected by indirect light antibody."Molecular X-mCherry" must be compiled and observed by a microscope. The red light is the light of the day. It is difficult to judge the position of the bureau clearly, and it is difficult to detect the position of the bureau in detail. Molecular X is an essential molecule, and its production is increasing, and its production is decreasing. In the process of preparation, the production of cell lines is increasing, and the production of protozoa is decreasing (3D7 strains). The molecular specific immune sedimentation mechanism is used to develop the molecular X specific antibody.