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孤発性IRF2BPL変異の患者由来iPS細胞を用いたNEDAMSS病態モデル確立

利用IRF2BPL散发突变患者的iPS细胞建立NEDAMSS病理模型

基本信息

批准号：
20K07763
负责人：
井上健一
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Dokkyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

正常型IRF2BPLおよび変異型IRF2BPL安定発現細胞株を用いて、タンパク質複合体の精製を試みた。正常型IRF2BPLのアフィニティタグにおける精製効率は高くなかったが、共沈降したタンパク質複合体の中に既知の結合タンパク質が含まれていた。IRF2BPドメインを共有するファミリータンパク質、IRF2BP2の結合を確認した。同様に変異型IRF2BPLをアフィニティタグで精製したところ、大量の内因性IRF2BPLが共沈降していた。アフィニティ樹脂に結合しない内因性IRF2BPLも大量に存在したことから、変異型IRF2BPLは内因性IRF2BPLの遺伝子発現を誘導することが示唆された。マイクロアレイの遺伝子発現解析では、NEDAMSS患者iPS細胞におけるIRF2BPL遺伝子発現が家族iPS細胞と比べて有意に上昇していた。以上の結果から、変異型IRF2BPLはそれ自体が内因性IRF2BPLタンパク質を発現誘導し、互いに結合することが明らかとなった。また正常型IRF2BPLタンパク質はファミリーであるIRF2BP2と結合していることから、このタンパク質はIRF2BPドメインを介して、ファミリータンパク質同士で協働することが示唆された。先行研究では、変異型IRF2BPLの細胞内局在は専ら強制発現系を用いて調べられている(Sinha Ray et al., Cell Rep., 2022)。ところが強制発現によって内因性IRF2BPLが大量に誘導されるのであれば、それらの観察が病態を正確に反映しているのか疑問が生じる。研究期間を延長した最終年度では、患者iPS細胞で内因性の変異型IRF2BPLが細胞内のどこに局在しているのか、ファミリータンパク質であるIRF2BP1とIRF2BP2も含めた内因性のIRF2BPファミリーの局在および機能的影響について調べる。

Normal IRF2BPL has been tested, and abnormal IRF2BPL stable cell lines have been purified and tested with the use of Takashi and Ginko plasmid complexes. Normal type IRF2BPL high purification efficiency , co-sedimentation of the material complex の中に known の combination of タンパクquality がcontaining まれていた. IRF2BP ドメインをshares the quality of するファミリータンパク, and the combination of IRF2BP2 is confirmed. The same type of IRF2BPL is refined, and a large amount of endogenous IRF2BPL is co-precipitated.アフィニティResin is bound to the endogenous IRF2BPL and is present in large amounts and is different. Type IRF2BPL and endogenous IRF2BPL are both induced and induced.マイクロアレイの缝子発 appear and analyze では, NEDAMSS patient iPS cells におけるIRF2BPL 缝子発appears and the family iPS cells are better than べて intentional and rise していた. The results of the above are that the heterogeneous IRF2BPL is autologous, the endogenous IRF2BPL is induced, and the combination is mutually beneficial.またNormal type IRF2BPLタンパク性はファミリーであるIRF2BP2とcombinationしていることから、このタンパク性はIRF2BPドメインを开して、ファミリータンパク性 Sameshi で合働することが时攆された. We first studied the intracellular localization of heterogeneous IRF2BPL and the forced expression of IRF2BPL in the cells (Sinha Ray et al., Cell Rep., 2022).ところがforced appearanceによってintrinsic IRF2BPLがa large amount of inducingされるのであれば、それらの観看がmorbidityをcorrectにreflectsしているのかquestionが生じる. During the study period, the end of the year was extended, and the endogenous heterogeneity of IRF2BPL in the patient's iPS cells was detected. The influence of タンパク性であるIRF2BP1 and とIRF2BP2もwith めたintrinsic のIRF2BP ファミリーのbureau on the function of およびについて Adjustment べる.