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孤発性IRF2BPL変異の患者由来iPS細胞を用いたNEDAMSS病態モデル確立

利用IRF2BPL散发突变患者的iPS细胞建立NEDAMSS病理模型

基本信息

批准号：
20K07763
负责人：
井上健一
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Dokkyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

正常型IRF2BPLおよび変異型IRF2BPL安定発現細胞株を用いて、タンパク質複合体の精製を試みた。正常型IRF2BPLのアフィニティタグにおける精製効率は高くなかったが、共沈降したタンパク質複合体の中に既知の結合タンパク質が含まれていた。IRF2BPドメインを共有するファミリータンパク質、IRF2BP2の結合を確認した。同様に変異型IRF2BPLをアフィニティタグで精製したところ、大量の内因性IRF2BPLが共沈降していた。アフィニティ樹脂に結合しない内因性IRF2BPLも大量に存在したことから、変異型IRF2BPLは内因性IRF2BPLの遺伝子発現を誘導することが示唆された。マイクロアレイの遺伝子発現解析では、NEDAMSS患者iPS細胞におけるIRF2BPL遺伝子発現が家族iPS細胞と比べて有意に上昇していた。以上の結果から、変異型IRF2BPLはそれ自体が内因性IRF2BPLタンパク質を発現誘導し、互いに結合することが明らかとなった。また正常型IRF2BPLタンパク質はファミリーであるIRF2BP2と結合していることから、このタンパク質はIRF2BPドメインを介して、ファミリータンパク質同士で協働することが示唆された。先行研究では、変異型IRF2BPLの細胞内局在は専ら強制発現系を用いて調べられている(Sinha Ray et al., Cell Rep., 2022)。ところが強制発現によって内因性IRF2BPLが大量に誘導されるのであれば、それらの観察が病態を正確に反映しているのか疑問が生じる。研究期間を延長した最終年度では、患者iPS細胞で内因性の変異型IRF2BPLが細胞内のどこに局在しているのか、ファミリータンパク質であるIRF2BP1とIRF2BP2も含めた内因性のIRF2BPファミリーの局在および機能的影響について調べる。

Normal IRF2BPL and variant IRF2BPL stable cell lines were used to purify the protein complex. The purification efficiency of normal type IRF2BPL is high, and the co-precipitation is high. IRF2BP2 is a combination of IRF 2BP and IRF2BP. IRF-2BPL is the same as IRF-2BPL, and it's a lot of intrinsic IRF-2BPL. A large number of intrinsic IRF2BPL molecules exist in the resin, and a large number of heterogeneous IRF2BPL molecules are induced in the resin. Analysis of gene expression in iPS cells of NEDAMS patients: IRF2BPL gene expression in family iPS cells increased significantly. The above results show that the heterogeneous IRF2BPL is not self-induced, and the interaction between them is not obvious. Normal IRF2BPL is characterized by a combination of IRF2BP2 and IRF2BP2, and by a combination of IRF2BP2 and IRF2BP2. In the first study, the intracellular regulation of IRF2BPL was investigated in response to stress (Sinha Ray et al., Cell Rep., 2022)。This is the first time that IRF2BPL has been detected. The study period was extended to the final year, and the patients 'iPS cells were affected by intrinsic and heterogeneous IRF2BPL, intracellular and functional changes, including intrinsic and heterogeneous IRF2BP1 and IRF 2BP 2.