核内低分子RNA snRNAU2関連断片の機能解明と肺癌予後マーカーとしての評価

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snRNA U2遺伝子（RNU2-1）のコピー数多型解析法の改良：当遺伝子のコピー数多型は数～数十以上と非常に幅があるため、リアルタイムPCR法による比較定量キットでは正確な結果を得ることは困難で、絶対定量を行う必要があった。令和3年度はこの条件設定を行い健常人検体のコピー数解析を行ったが、この方法は煩雑で、誤差が生じやすかった。そのため令和4年度はデジタルPCR法を用いる方向で改めて条件検討を行い、健常者DNAについてデータを得た。リアルタイムPCR法を用いた場合とほぼ同じ結果であったが、得られたデータの信頼性は高くデータ取得に要する時間は大幅に短縮することができた。肺癌患者検体の収集は本学医学部付属病院において行うことを計画していたが、バイオバンクより提供を受けるため新たに倫理審査申請を行った。snRNA断片の定量における交叉反応の可能性の解析：データベース情報によれば、miR-1246（snRNA U2断片）の塩基配列は少なくとも6種のsnRNA U2偽遺伝子に保存されている。本研究で注目しているpseudo U2断片（偽遺伝子RNU2-2Pに由来）の塩基配列については他には相同配列が見られないことが分かった。これは疾患マーカーとして有利な点である。miR-1246 isoformに関する解析：既存の肺癌患者血清を用いた解析により、肺腺癌患者の血中miR-1246レベルの上昇は、miRBase型ではなく5’末端が2塩基短いisoformの上昇によるものであることを明らかにし報告した（Aiso T & Ueda M. Mol Med Rep 27:12979, 2023）。この成果はmiR-1246の標的遺伝子を理解する上で重要な情報を与える。