Application of a gene expression visualization system to analyze cancer stem cell generation

应用基因表达可视化系统分析癌症干细胞的生成

• 批准号: 20K08101
• 负责人: 小川 良平
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08101/
• 关键词: がん幹細胞; 上皮間葉転換; CRISPR-Cas9; 遺伝子発現可視化; 2A配列; ゲノム編集

肝臓がん由来のHepG2細胞と前立腺がん由来のDU145細胞では、EMT後にCSCマーカー発現の増加を以前に確認している。そこで、それぞれのOct4遺伝子の下流にEGFP遺伝子をCRISPR-Cas9で導入して作成した細胞を、昨年度、前立腺がん由来のLNCaPをもとに作成したOct4遺伝子発現可視化細胞と同様に、EMT誘導剤を含む培地（EMT培地）および　CSC-Sphere培地（CSC培地）での培養を行った。EMT培地での培養ではOct4下流に結合したEGFPの発現は顕著な増強は認められなかったが、CSC培地では細胞全体の蛍光として約２倍程度の発現増強を示すクロンを複数取得した。Medical Science Digest誌（2022年48/12月号）に「放射線により誘発する腫瘍内細胞死の可視化」というタイトルで総説を発表した。本総説では、細胞内にインテインを利用したルシフェラーゼ活性のオン・オフスイッチを構築し、放射線によって引き起こされるアポトーシス及びネクローシスでこのスイッチを制御することでそれぞれの細胞死を可視化した。構築したこれらの細胞を利用して、放射線により引き起こされる細胞死の解析を行ったことについて報告した。また、日本放射線腫瘍学会第59回生物部会学術大会で、「高線量X線照射による腫瘍内アポトーシスの誘発メカニズム」というタイトルで発表をおこなった。本発表では、アポトーシスを可視化するために構築した細胞を利用して、高線量放射線により引き起こされるアポトーシスのメカニズムについて解析したことを報告した。

A routine liver が ん origin の HepG2 cells と front gland が ん origin の DU145 cell で は, EMT に CSC マ ー カ ー 発 now の raised を に confirmation before し て い る. そ こ で, そ れ ぞ れ の Oct4 posthumous son 伝 の obscene に EGFP posthumous son 伝 を CRISPR - Cas9 で import し て made し た cell を, last year, front gland が ん origin の LNCaP を も と に made し た Oct4 posthumous son 伝 発 と visual cells with others now に, EMT induced を contain む petty (EMT) culture お よ び CS C-Sphere sphere (CSC sphere) で で cultivate を rows った. EMT petty で の cultivate で は Oct4 obscene に combining し た EGFP の 発 now は 顕 the な raised strong は recognize め ら れ な か っ た が, CSC petty で は cells all の 蛍 light と し て about 2 times the degree の 発 now raised strong を shown す ク ロ ン を plural obtain し た. Medical Science Digest volunteers (48 / December 2022) に "radiation に よ り 発 lure す る swollen sores inside cells die の visualization" と い う タ イ ト ル で 総 said を 発 table し た. Said this 総 で は, intracellular に イ ン テ イ ン を using し た ル シ フ ェ ラ ー ゼ active の オ ン · オ フ ス イ ッ チ を constructing し, radiation に よ っ て lead き up こ さ れ る ア ポ ト ー シ ス and び ネ ク ロ ー シ ス で こ の ス イ ッ チ を suppression す る こ と で そ れ ぞ れ の cell death を visualization し た. Build し た こ れ ら を の cells using し て, radiation に よ り lead き up こ さ れ る cell death の analytic を っ た こ と に つ い て report し た. ま た swollen sores, Japan radiation society back to the department of biological science conference 59 で, high speed wire rod quantity "X-ray irradiation に よ る swollen sores in ア ポ ト ー シ ス の 発 lure メ カ ニ ズ ム" と い う タ イ ト ル で 発 table を お こ な っ た. This 発 で は, ア ポ ト ー シ ス を visualization す る た め に build し を た cells using し て, elevated radiation に よ り lead き up こ さ れ る ア ポ ト ー シ ス の メ カ ニ ズ ム に つ い て parsing し た こ と を report し た.

项目成果

放射線により誘発する腫瘍ない細胞死の可視化

辐射诱导的无肿瘤细胞死亡的可视化

• 发表时间: 2022
• 期刊: Medical Science Digest
• 作者: 鍵谷豪;小川良平;畑下昌範
• 通讯作者: 畑下昌範

高線量X線照射による腫瘍内アポトーシスの誘発メカニズム

高剂量X射线照射诱导瘤内细胞凋亡的机制

• 发表时间: 2022
• 作者: Chang Yung-Chun;Hsing Yan-Chun;Chiu Yu-Wen;Shih Cho-Chiang;Lin Jun-Hong;Hsiao Shih-Hsin;Sakai Koji;Ko Kai-Hsiung;Chen Cheng-Yu;古徳 純一;青柳美希，小川良平，畑下昌範，兵藤文紀，鍵谷 豪
• 通讯作者: 青柳美希，小川良平，畑下昌範，兵藤文紀，鍵谷 豪