肝疾患治療用細胞シートの液性因子に着目した新規肝硬変治療法の開発

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温度応答性培養皿上で間葉系幹細胞(MSC)にWnt/β-catenin経路阻害剤IC-2を添加し作製する肝疾患治療用細胞シートは、マウス肝表面へ移植した際に、IC-2未処理のMSCシートよりも強い線維化抑制効果を示す。この線維化抑制効果は、移植肝葉とは別の肝葉でも認められることから、細胞シートより産生される液性因子が肝線維化抑制効果に重要と考えられる。本研究では、肝線維化抑制作用を示す因子を同定し、その肝線維化抑制効果を肝硬変モデルマウスで検証し、Proof of Concept (POC)を確立することを目的とする。IC-2処理MSCの濃縮培養上清からなるセクレトームを限外ろ過フィルターにより分画すると、約10－30kDaの分画が肝星細胞活性化抑制効果を示す。該当分画をさらにゲルろ過クロマトグラフィーにて50分画と細分画化し、肝星細胞活性化抑制効果を示す分画に含まれるタンパクを質量分析により解析したところ、上位20タンパクの中には、すでに線維分解酵素として知られているマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)-1が含まれていた。しかし、MMP-1のリコンビナントタンパクは肝星細胞の活性化を抑制しなかったことから、MMP-1以外のタンパクが肝星細胞活性化抑制効果を示すと推察される。一方、ラット腎線維芽細胞の上皮間葉転換(EMT)による腎線維症モデルのin vitro評価系では、約50－100kDaの分画がαSMAの発現抑制作用を示す。肝線維化抑制候補因子同様、ゲルろ過クロマトグラフィーにて50分画と細分画化し、腎線維化抑制作用を示す分画を選出した。質量分析を実施し、腎線維化抑制の本態となる分子の抽出を進める予定である。