抗線維化作用増強exosomeを用いた継続型低侵襲肝臓再生療法の開発

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我々は肝移植に代わる肝硬変治療法として「自己骨髄間葉系幹細胞 (MSC)を用いた肝臓再生療法」を開発してきた。臨床研究で有効性が示唆されたが、効果が短期間であることが課題であった。そこで本研究では、MSC由来exosomeに、miR-5682の肝星細胞に対する線維産生抑制効果を付加した抗線維化作用増強exosomeを作製する。miR-5682は肝星細胞が産生する主な線維（Collagen I, III, V, Elastin）の発現を網羅的に抑制するmicroRNAである。これにより低侵襲かつ頻回投与が可能な抗線維化治療法を開発し、「長期継続型のMSCを用いた低侵襲肝臓再生療法」のProof of concept 取得を目指す。令和4年度は、レンチウイルスベクターを用いてmiR-5682導入MSC細胞株およびmiR-5682導入単球細胞株を複数株作製して、miR-5682導入効率と細胞増殖への影響を比較検討した。in vivoマウス肝線維化モデルでの有効性の評価には多量のexosomeを要するため、本検討でexosomeの抽出に適した十分な細胞増殖性とexosome中にmiR-5682を高発現する特性を併せ持つ細胞株の選定を行った。さらに、miR-5682導入細胞株由来exosomeに含まれるmicroRNAについて網羅的解析を行い、exosome中のmicroRNAにおけるmiR-5682の比率について評価した。また、miR-5682導入細胞株由来exosomeを肝星細胞に添加し、線維産生抑制効果に用量依存性があることを確認し、Gubra-Amylin NASH (GAN)食を用いてNASH肝線維化モデルマウスを用いてmiR-5682導入細胞株由来exosomeの抗線維化効果の評価を行った。