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抗線維化作用増強exosomeを用いた継続型低侵襲肝臓再生療法の開発

使用抗纤维化增强外泌体开发连续微创肝再生疗法

基本信息

批准号：
20K08386
负责人：
松本俊彦
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08386/
关键词：
間葉系幹細胞肝線維化 microRNA

项目摘要

我々は肝移植に代わる肝硬変治療法として「自己骨髄間葉系幹細胞 (MSC)を用いた肝臓再生療法」を開発してきた。臨床研究で有効性が示唆されたが、効果が短期間であることが課題であった。そこで本研究では、MSC由来exosomeに、miR-5682の肝星細胞に対する線維産生抑制効果を付加した抗線維化作用増強exosomeを作製する。miR-5682は肝星細胞が産生する主な線維（Collagen I, III, V, Elastin）の発現を網羅的に抑制するmicroRNAである。これにより低侵襲かつ頻回投与が可能な抗線維化治療法を開発し、「長期継続型のMSCを用いた低侵襲肝臓再生療法」のProof of concept 取得を目指す。令和4年度は、レンチウイルスベクターを用いてmiR-5682導入MSC細胞株およびmiR-5682導入単球細胞株を複数株作製して、miR-5682導入効率と細胞増殖への影響を比較検討した。in vivoマウス肝線維化モデルでの有効性の評価には多量のexosomeを要するため、本検討でexosomeの抽出に適した十分な細胞増殖性とexosome中にmiR-5682を高発現する特性を併せ持つ細胞株の選定を行った。さらに、miR-5682導入細胞株由来exosomeに含まれるmicroRNAについて網羅的解析を行い、exosome中のmicroRNAにおけるmiR-5682の比率について評価した。また、miR-5682導入細胞株由来exosomeを肝星細胞に添加し、線維産生抑制効果に用量依存性があることを確認し、Gubra-Amylin NASH (GAN)食を用いてNASH肝線維化モデルマウスを用いてmiR-5682導入細胞株由来exosomeの抗線維化効果の評価を行った。

We have developed liver regeneration therapy using mesenchymal stem cells (MSCs) in liver transplantation. Clinical research is a short-term project. In this study, MSC derived from exosome, miR-5682 and hepatocytes to inhibit the production of line maintenance effect to enhance the role of anti-line maintenance exosome. miR-5682 inhibits the development of Collagen I, III, V, Elastin in hepatic stellate cells. The aim of this paper is to provide a Proof of concept for the development of a low-invasive, frequency-responsive and potentially anti-maintenance therapy for long-term use of MSC in liver regeneration therapy. To compare the effects of miR-5682 introduction on MSC cell lines and miR-5682 introduction on cell proliferation in vitro in 2004 and 2005. In vivo, the effective evaluation of cell line maintenance in vivo, the extraction of exosome, the high expression of miR-5682 in exosome, and the selection of cell lines are discussed. In addition, miR-5682 introduced into cell lines from exosome contains microRNA in the analysis of the network, exosome microRNA in the ratio of miR-5682 in the evaluation. The dose-dependence of miR-5682 introduced cell line derived from exosome was confirmed. Gubra-Amylin NASH (GAN) was used to evaluate the effect of miR-5682 introduced cell line derived from exosome on the inhibition of linear maintenance.