リンパ脈管筋腫症の分子標的治療に向けたエストロゲンのリンパ管新生制御の解明

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エストロゲン刺激による リンパ管内皮細胞（LEC） の増殖評価目的のため、健常コントロールとしてHuman dermal lymphatic endothelial cell (HDLEC)と肺微小血管内皮細胞（HMVEC-L）からFACSを用いてCD31陽性及びポドプラニン陽性の皮膚LECと肺LECを分離した。まずMCF7を用いてエストロゲン至適濃度を確認した。そしてCCK-8を用いた細胞増殖解析のプロトコールを確立させた。エストロゲン添加の際には添加1週間前よりフェノールレッドフリー培地に、チャコール処理をした血清を添加した培地を用いている。エストロゲン添加24時間前から血清は5％から0.5％に下げている。CCK-8による細胞増殖解析を皮膚LECで行ったが、エストロゲンの添加では明らかな細胞増殖は認められなかった。エストロゲンを添加すると細胞生存の維持は認められた。しかしエストロゲンを添加すると添加していないものと比較して細胞の生存の維持が認められた。エストロゲン添加下で皮膚LECを培養した際のVEGFR-3の発現量をmRNAレベルではリアルタイム定量PCR（Q-PCR）、タンパクレベルではFACSによるMean Fluorescent Intensity（MFI）を用いて定量した。Q-PCRでは顕著な発現量の上昇は認められず、タンパクレベルではエストロゲンを添加したLECのほうがVEGFR-3の発現量が増加している傾向にあるが皮膚LECにおいては有意差はでていない。肺LECにおいても現在進行中である。エストロゲンは細胞増殖にはかかわっていない可能性があり、リンパ管内皮細胞の機能に影響している可能性を考えている。