乳歯歯髄幹細胞培養上清由来因子を用いた新規皮膚炎治療法の検討

利用乳牙牙髓干细胞培养上清液衍生因子研究新的皮炎治疗方法

基本信息

批准号：
20K08690
负责人：
橋本登
金额：
$ 2.75万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト歯髄幹細胞培養上清(SHED-CM)において同定された分泌型Siglec-9(sSiglec-9)による炎症性皮膚疾患に対する抗炎症・皮膚バリア再生効果を検討するために以下の検討を行った。卵白アルブミン(OVA)誘導アトピーマウスに対しsSiglec-9の尾静脈投与をおこなった。その結果、sSiglec-9投与群では対照群に比べ、皮膚の肥厚や肥満細胞の誘導を抑制し抗炎症効果があることが示された。sSiglec-9を含有するSHED-CMをアトピーマウスに投与し、二次リンパ組織である脾臓の解析を行った。炎症時にはリンパ小節において胚中心が見られ、免疫系の細胞の成熟化が起こる。SHED-CM投与マウスでは対象群に比べ胚中心の形成が抑制されていた。また、CD4+細胞（CD4＋T細胞）の局在に変化が見られた。このことからSHED-CMは炎症部だけではなく二次リンパ組織に対しても抗炎症効果を示すことが示唆された。結合時におけるsSiglec-9薬理活性の解析を行った。 sSiglec-9が炎症系M1マクロファージの活性制御を示すことがわかっている。Siglec-9のリガンド糖鎖キャリアタンパクの同定を行うためにLC/MSによる網羅的解析を行った。マクロファージ様細胞RAW264.7に対しSiglec-9-Fcを用い免疫沈降を行いLC/MSに供した。この結果からSiglec-9特異的に結合する3つの分子を同定した。マウス骨髄由マクロファージに対し3分子に対する特異的な抗体を用いウエスタンブロッティングを行ったところ同様な結果が得られたことからこれら3分子はSiglec-9が特異的に認識するマクロファージに共通している分子であることが示唆された。これら3つの分子の意義を検討している。

进行了以下研究，以研究分泌SIGLEC-9（SSIGLEC-9）的抗炎和皮肤屏障再生作用在人牙牙髓干细胞培养物（SHED-CM）中针对炎症性皮肤疾病的抗炎和皮肤再生作用。用ssiglec-9给予卵蛋白（OVA）诱导的特应小鼠。结果，与对照组相比，SSIGLEC-9处理的组具有抗炎作用，抑制皮肤增厚和肥大细胞诱导。分析了含有Ssiglec-9的SHED-CM对特应小鼠的施用，并分析了脾脏的脾脏。在炎症期间，在淋巴结中看到生发中心，导致免疫系统中细胞的成熟。与目标组相比，用SHED-CM处理的小鼠抑制了生发中心的形成。此外，在CD4+细胞（CD4+ T细胞）的定位中观察到了变化。这表明SHED-CM不仅对炎症区域，而且对继发性淋巴组织具有抗炎作用。分析了结合后SSIGLEC-9的药理活性。已经发现Ssiglec-9控制炎症性M1巨噬细胞的活性。 LC/MS进行了详尽的分析，以鉴定Siglec-9的配体聚糖载体蛋白。使用SIGLEC-9-FC对RAW 264.7的巨噬细胞样细胞进行免疫沉淀，并经过LC/MS。从这些结果中，鉴定出了特异性结合Siglec-9的三个分子。使用对小鼠骨髓巨噬细胞的三个分子的特异性抗体进行蛋白质印迹，并获得了相似的结果，这表明这三个分子是巨噬细胞共有的分子，这些分子是巨噬细胞共有的，这些分子是特定识别siglec-9的。我们正在研究这三个分子的重要性。