マスト細胞分泌顆粒プロテオミクスを活用したアレルギー治療標的候補遺伝子の探索

使用肥大细胞分泌颗粒蛋白质组学寻找过敏治疗靶点的候选基因

• 批准号: 20K08784
• 负责人: 田中 正太郎
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08784/
• 关键词: マスト細胞; 分泌顆粒局在タンパク質; プロテオミクス; 遺伝子ノックダウン; 分泌顆粒; ライブイメージング; アレルギー; 治療標的遺伝子探索

本研究では、マスト細胞の分泌顆粒に局在するタンパク質を特異的に回収し、プロテオーム解析を行うことで、分泌顆粒の形成・維持・機能・再生に関わる遺伝子を特定する研究を進めている。これまでに、既知の分泌顆粒局在タンパク質（３種類）の遺伝子導入細胞および抗体ビーズを利用した特定の分泌顆粒の回収技術の確立、プロテオミクスとその解析、候補遺伝子の選定をおこなってきた。本年度は、前年度までに選定した分泌顆粒の形成や機能に関わると思われる34遺伝子について、siRNAを設計、これをそれぞれ一過的に細胞に導入して機能を抑制（ノックダウン）し、野生型の分泌顆粒の形質（構造や個数、細胞内分布、機能）と共焦点顕微鏡によるライブイメージング技術で比較することで、各々の機能の推測を順次進めた。この結果、７遺伝子について明確な変化を確認した。うち１遺伝子はノックダウンにより脱顆粒の頻度が野生型に比べて抑制された。また３遺伝子は平常時の分泌顆粒の形状や局在に異常が認められた（肥大・縮小・分布変化）。さらに３遺伝子は脱顆粒後の分泌顆粒の再集合状態に異常が認められた。これらの遺伝子はいずれもこれまでに分泌顆粒の機能や形成・維持・再生についての関与が報告されていないものであった。現在はそれぞれの遺伝子について、再現性を確認するとともに、これらの結果をサポートする生化学的データを準備している。また、これらの成果をまとめて論文化を進めている。以上の内容を日本生化学会2022年大会（ポスター番号3P-153）にて報告した。

在这项研究中，我们正在进行研究，以特异性收集肥大细胞分泌颗粒中定位的蛋白质，并进行蛋白质组分析，以鉴定与分泌颗粒的形成，维持，功能和再生有关的基因。到目前为止，我们已经建立了使用已知分泌颗粒局部蛋白质（3种类型）和抗体珠的转基因细胞以及蛋白质组学及其分析以及选择候选基因的技术来恢复特定的分泌颗粒。今年，SIRNA的设计是为34个基因设计的，这些基因可能与上一年所选择的分泌颗粒的形成和功能有关，并且每个基因都被暂时引入（敲低）其功能，并将其特质（结构，数量，数量，细胞内分布，功能）与野生型肉芽素食的繁殖技术进行比较，以抑制（敲低）它们的功能，并将其与野生型杂物进行了繁殖。每个功能的功能。结果，确认了这七个基因的明显变化。与野生型相比，将其中一个基因敲低以抑制脱粒的频率。另外，在正常条件下（肥大，还原和分布变化）在分泌颗粒的形状和定位中观察到异常。此外，在三个基因中观察到脱粒后分泌颗粒的重组状态的异常。以前，这些基因都没有涉及分泌颗粒的功能或它们的形成，维持和再生。当前，我们正在检查每个基因的可重复性并准备生化数据以支持这些结果。我们还将这些结果汇总在一起，并促进讨论文化。以上是在日本生物化学协会2022会议上报道的（海报编号3P-153）。

项目成果

プロテオーム解析によって同定されたマスト細胞分泌顆粒局在タンパク質の機能解析

通过蛋白质组学分析鉴定肥大细胞分泌颗粒定位蛋白的功能分析

• 发表时间: 2021
• 作者: Craig TJ;Reshef A;Li HH;Jacobs JS;Bernstein JA;Farkas H;Yang WH;Stroes ESG;Ohsawa I;Tachdjian R;Manning ME;Lumry WR;Saguer IM;Aygoren-Pursun E;Ritchie B;Sussman GL;Anderson J;Kawahata K;Suzuki Y;Staubach P;Treudler R;Feuersenger H;Gl;田中正太郎
• 通讯作者: 田中正太郎

マスト細胞の分泌顆粒プロテオミクスに基づく 新規脱顆粒制御遺伝子の探索

基于肥大细胞分泌颗粒蛋白质组学寻找新型脱颗粒控制基因

• 发表时间: 2022
• 作者: 田中正太郎;中村史雄
• 通讯作者: 中村史雄