マスト細胞分泌顆粒プロテオミクスを活用したアレルギー治療標的候補遺伝子の探索

点击翻译按钮获取中文摘要

本研究では、マスト細胞の分泌顆粒に局在するタンパク質を特異的に回収し、プロテオーム解析を行うことで、分泌顆粒の形成・維持・機能・再生に関わる遺伝子を特定する研究を進めている。これまでに、既知の分泌顆粒局在タンパク質（３種類）の遺伝子導入細胞および抗体ビーズを利用した特定の分泌顆粒の回収技術の確立、プロテオミクスとその解析、候補遺伝子の選定をおこなってきた。本年度は、前年度までに選定した分泌顆粒の形成や機能に関わると思われる34遺伝子について、siRNAを設計、これをそれぞれ一過的に細胞に導入して機能を抑制（ノックダウン）し、野生型の分泌顆粒の形質（構造や個数、細胞内分布、機能）と共焦点顕微鏡によるライブイメージング技術で比較することで、各々の機能の推測を順次進めた。この結果、７遺伝子について明確な変化を確認した。うち１遺伝子はノックダウンにより脱顆粒の頻度が野生型に比べて抑制された。また３遺伝子は平常時の分泌顆粒の形状や局在に異常が認められた（肥大・縮小・分布変化）。さらに３遺伝子は脱顆粒後の分泌顆粒の再集合状態に異常が認められた。これらの遺伝子はいずれもこれまでに分泌顆粒の機能や形成・維持・再生についての関与が報告されていないものであった。現在はそれぞれの遺伝子について、再現性を確認するとともに、これらの結果をサポートする生化学的データを準備している。また、これらの成果をまとめて論文化を進めている。以上の内容を日本生化学会2022年大会（ポスター番号3P-153）にて報告した。