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ゲノム編集技術を用いた多剤耐性呼吸器糸状菌感染症の薬剤耐性機構の解明

利用基因组编辑技术阐明多重耐药呼吸道真菌感染的耐药机制

基本信息

批准号：
20K08834
负责人：
梅山隆
金额：
$ 2.83万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08834/
关键词：
薬剤耐性多剤耐性呼吸器真菌症糸状菌症ゲノム編集

项目摘要

深在性真菌症の中でも侵襲性肺アスペルギルス症とムーコル症を含む糸状菌感染症は、最も有効とされている治療薬を用いても致命率が50%を超える。さらに、薬剤耐性による難治化が臨床上大きな問題となっているだけでなく、環境中にも耐性株が拡散して世界規模の課題になっているが、薬剤耐性機構の詳細は未だ明らかになっていない。本研究は、1)ゲノム編集技術を用いた多剤耐性病原糸状菌のアゾール耐性機構の検証、2)ゲノム編集技術を用いた変異株ライブラリ作製とスクリーニングによるアムホテリシンB耐性に関係する遺伝子探索、により多剤耐性糸状菌の薬剤耐性メカニズムを解明し、早期耐性検出法と新しい治療法の開発に貢献する。令和4年度では、Aspergillus fumigatusのCRISPRプラスミドライブラリをエレクトロポレーション法で高効率に形質転換する方法を確立した。プラスミドライブラリの導入によりA .fumigatus CRISPRライブラリを作製し、DNA抽出後にガイドRNA領域をPCRで増幅し、ナノポアシーケンサによるアンプリコン解析を用いてCRISPR screenの検証を行っている。多剤耐性糸状菌Lomentospora prolificansにCRISPR/Cas9ゲノム編集技術を導入する基盤として、ハイグロマイシン耐性マーカを含むプラスミドを構築し、エレクトロポレーション法でゲノム上のrRNA領域にプラスミドを相同組換えで挿入できる形質転換系を確立した。

In deep fungal diseases, invasive pulmonary diseases, including fungal infections, are the most common causes of death, with a mortality rate of 50% or more. In addition, drug resistance is becoming more and more difficult to treat. In clinical practice, drug resistance is becoming more and more difficult to treat. In environment, drug resistance is becoming more and more difficult to treat. In world scale, drug resistance is becoming more and more difficult to treat. This study is aimed at: (1) identification of resistant mechanisms of multi-resistant pathogens by using genome compilation techniques;(2) exploration of resistant relationships between multi-resistant pathogens by using genome compilation techniques;(3) elucidation of resistant mechanisms of multi-resistant pathogens;(4) early identification of resistant mechanisms; and (5) development of novel treatments. In 2010 and 2014, the CRISPR system of Aspergillus fumigatus was established. A . numeratus CRISPR gene expression is controlled, PCR amplification in RNA domain is increased after DNA extraction, and CRISPR gene expression is analyzed by CRISPR screen detection. The CRISPR/Cas9 gene assembly technology for Lomentospora prolificans was introduced into the base plate and the gene assembly system was established.

项目成果

期刊论文数量（29）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Clinical and Microbiological Characteristics of Proven Invasive Aspergillosis Due to Rare/Cryptic Species in Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant Recipients

已证实的同种异体造血干细胞移植受者中稀有/隐性物种引起的侵袭性曲霉病的临床和微生物学特征

DOI：
10.1128/aac.01630-21
发表时间：
2022
期刊：
Antimicrobial Agents and Chemotherapy
影响因子：
4.9
作者：
Yamamuro Ryosuke;Kimura Muneyoshi;Asano-Mori Yuki;Abe Masahiro;Nakamura Shigeki;Umeyama Takashi;et al.
通讯作者：
et al.

新規アスペルギルス症検査の開発

开发新的曲霉病测试